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1、,第一节 分光光度法基本原理,第二节 紫外-可见分光光度计,第三节 分析条件的选择,第8章 紫外-可见分光光度法,第一节 紫外-可见分光光度法基本原理,一、光的基本性质,治疗肿瘤的刀,切尔诺贝利事故后核辐射导致人畸形,X射线计算机断层扫描装置(CT)、,无线数据网，各种移动通讯以及无线电广播等,散射：蔚蓝色的天空和早晚偏红色的太阳,1984年9月北京天安门广场激光表演调试时的照片,光的折射,光的反射,单色光：具有单一波长的光。激光接近于单色光复合光：具有多种波长的光。如日光、白炽灯光可见光：肉眼能够感觉到的光互补色光:把适当颜色的两种单色光按一定的强度 比例混合，也可以成为白光。这两种单色光就
2、叫做互补色光。,二、物质对光的选择性吸收1、溶液颜色是物质对光选择性吸收的结果,物质颜色与吸收光颜色的互补关系,2、溶液的吸收光谱曲线,三、朗伯-比尔定律 1、地位：物质对光的吸收定量依据为朗伯-比尔定律。朗伯-比尔定律是光吸收的基本定律，也是分光光度法的依据和基础。2、主要内容,朗伯定律,比尔定律,吸收物质在一定波长和溶剂条件下的特征常数,max越大表明该物质的吸光能力越强，用光度法测定该物质的灵敏度越高,在溶剂和波长等条件一定时,仅与吸收物质本身的性质有关，与b和c无关；,3、偏离朗伯-比尔定律,正偏离：实际吸光度理论值负偏离：实际吸光度理论值,解离等化学因素,第二节 紫外-可见分光光度计
3、,一、仪器的基本构造,1、光源,紫外光源-氘灯(185-375 nm),可见光源-钨灯(320-1000nm),2、单色器作用：将光源发射的复合光分解成单色光组成：,3、吸收池,使用注意事项：（1）使用前后要彻底清洗。（2）严禁用手指、硬纸和布触摸透光面（3）严禁加热烘烤。（4）样品溶液的量以池体积的4/5为宜，使用挥发性溶液应加盖。（5）含有腐蚀玻璃的物质的溶液时，不得长时盛放。,吸收池的形状,4、检测器,作用：利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，种类：硒光电池、光电二极管、光电倍增管、硅二极管阵列检测器,5.结果显示记录系统,检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理,
4、二、仪器的类型及特点,优缺点：结构简单、价格便宜，但操作麻烦，误差大应用：应用于定量分析，一般不能作全波段光谱扫描,1.单波长单光束分光光度计,原理：,原理：优点：操作简单，消除了因光源强度变化而带来的误差,2、单波长双光束分光光度计,动画,3、双波长分光光度计,优点：仪器操作简单，精确度高，不仅能测定高浓度、多组分混合物，并且能测定浑浊试样。,原理：,动画,指示波长准确度的检验,透射比正确度的检验,稳定度的检验,吸收池配套性的检验,第三节 分析条件的选择及定量分析,一、显色条件的选择,1、基本概念,实验确定适宜酸度，绘pH-A线,T-A曲线的平坦处,点击添加文本 点击添加文本,pH,显色剂用
5、量,显色温度,显色时间,多为室温，视情况而定,3、显色条件的选择,硫氰酸盐,钼 酸 铵,氨 水,过氧化氢,氨基水杨酸,邻 菲 啰 啉,结 晶 紫,孔 雀 绿,4、显色剂的种类,二、测量条件的选择,紫外吸收光谱有关术语（补充）,（1）生色团 分子中能吸收紫外或可见光的结构单元 生色团为不饱和基团：C=C、N=O、C=O、C=S等（2）助色团 本身没有生色功能，但当它们与生色团相连时，使生色团吸收峰向长波位移动并增加其强度的官能团。,3、红移和蓝移,三、紫外-可见分光光度法应用,（一）定性鉴定 1、化合物的鉴定（采用吸收光谱对照法）2、化合物纯度鉴定 3、有机化合物机构分析,（二）定量测定1、单组份化合物的分析（标准曲线法）,光谱信息完全独立,光谱信息部分独立,2、混合物中多组分的测定,已知NO2-在355nm处355=23.3 L/(molcm)，302nm处302=9.32 L/(molcm)；NO3-在355nm处355=0 L/(molcm)，302nm处302=7.24 L/(molcm)，现有一含有NO2-和NO3-的试样，用1cm比色皿测得A355=0.730，A302=1.010，试样中NO2-和NO3-的浓度为多少？,
