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1、RW264.7细胞株的相关信息RAW2e4.7nU$431.0My：ATCCMtte及太费图：5W*!H三H索取报价VAccmw三y：*ItS人：ATCC啪由工电懦：1800638659T如伴:onafleei8三e三tt5JUff0TIi随计划让您仍为加心|XDSign徜onsRAW网7Dpo4orWCRwchM,BcateWShjmcBA1.BkIbwcsuitesDtseMe:Abetonmunneleukemiavrus11edtumorCeiIyp:mtcroaoe.AbelsonrrMrbewuemsirttwr/TrnfrdhrsccymS*WonIo9MTAme11noneea
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5、t*d1S1775OCATCCcM11tetgrowthIiwdMNncThebasemediumfcf9HscelllineaATCC-VmuIatodDb4ccoMc3iodEeMeaUmtCataBNo30-2002Tomatethecompletegr*1medum.ac311dlo)doC02),5%UnpeU*37.(TCPTotSuuuIMGft3f980呷90”卬WngFora75cm2ft*sk,rem(wtbut!Omlculturemedium(adustmourrtaccorntftorctercuturevssels)D8c*wcesfromtneflasksubst
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7、TCC302002faomfw3MServnATCC30-20201135Raqp*iP.NakorcIArUDotffdependantMlingofo11trc951.1977PubMW8940311207Rhk*WC.etFuncnonalmcrodesrum(DMM)motetocontain4rrM1.-gM&mtne.4500rrgf1.gfcose,1rrMSOdiumpyruvalefsdiXOmgf1.sodiumbicatm那.Formulation:Fam3灰IOnProductFormat:500m1.Comments:NOTE:This/educedfevHofsdf
8、umbica,bomg(NHCO3,1.5gf1.)isintendedforUSein5%CO2inair.AddHionsisodiumbicarbon*QmayberequitedforuseinncbtorscontainingigherpercentagesofCO2SubculturingProcedureSubculturesarepreparedbyscrapingFora75cm2flask,removeallbut10mlculturemedium(adjustamountaccordinglyforotherculturevessels).Dislodgecellsfro
9、mtheflasksubstratewithacellscraper;aspirateandaddappropriatealiquotsofthecellsuspensionintonevculturevessels.SubcultjvationRatio:1:3to1:6MediumRenewalReplaceoraddmediumevery2to3days.CompleteGrowthMediumThebasemediumforthiscelllineisATCC-formulatedDulbeccosModifiedEaglesMedium.CatalogNo.30-2002.Tomak
10、ethecompletegrowthmedium,addthefollowingcomponentstothebasemedium:fetalbovineserumtoafinalconcentrationof10%Thismediumisformulatedforusewitha5%CO2inairatmosphere.(StandardDMEMformulationscontain3.7g/1.sodiumbicarbonateanda10%CO2inairatmosphereisthenrecommended).ATCCtestedfetalbovineserumisavailablea
11、sATCCCatalogNo.30-2020andATCCCatalogNo.30-2021(100ml).CryoprotectantMediumCompletegrowthmediumdescribedabovesupplementedwith5%(vv)DMSO.ATCC：美国模式培育物集存库(AmeriCantypeculturecollection)的简写收到冷冻管细胞的处理方式1.收到细胞株包袱时，请检查细胞株冷冻笆是含有解冻情形.心清勺上通知.细胞株请尽速起先培杼，或马上冷冻保存（置干-70C,隔夜后,移到液氮）。2.收到T25flask细胞的处理方式于寄送过程中，为避开起泡造成
12、细咆脱落死亡，T25flask均加满培1. 1.检查flask外观，并于显微境下视察细胞生长状况和有无污染现象，若有任何问遨.不要打开装子，请马上通知细胞试脸室.2. 2.将原财之T25flask静次于379,5%CQ2培Ff箱中，使细胞回温至37C,并让运输过程中少数脱落的细胞可再附着生长.2.3.隔天后,于无菌操作箱内取出flask内之培育基.（取出之培育基可以再运用）,仅留妁5-10l培闫基于flask内.依-般培H方式再将细胞谀入培育和中，或细胞已长满盘，则将细胞做传代培育,RAW264.7细胞株的CellCulture一、RAW264.7ft胞培Ir的特点1、RA264.7细腮一般为
13、Bl形或椭圆形,功能活次时，可呈多突形，细胞核为圈形或椭圆出,染色较深.贴壁特殊里同。2、RAW264.7具有很强的吞噬实力，当吞噬抗京后，细胞会择放趋化因子，进一步促进细胞伸出伪足，增加枯网桀点实力.细胞吞噬抗原过多、培有环境恶劣都会促进该细胞现根形、长梭形,镜下会看到具有瘦长伪足的小细胞被类似上皮的梭形大细胞取代.3、好次传代都很戏消化下来.用力过大则对细胞损伤较大，这种细胞传代时接种密慢要大，否则葡单使巨噬细胞向终末细胞分化，细胞变成长形,并且不能回Jb这是培育这种细胞时最须要留电的向阳.4、对于RAW2617细胞他的声场时再爱结伴。正常生长状态应当是一小片一小片的生长，片片之间不连接,
14、等到长到更多史密的时候会连成大片,并且会交加成层.所以要很好地限制好细胞的生长速度，不要等到会加成层的时候再传代.5,RAW264.7细胞传代后贴壁时间较短，半小时就能贴许多，刚贴壁是细胞圾阴形，折光度很好.镜下视察如小珍宝状一个个地散落于瓶底面“生长一段时间后,部分细施会变成类似四角形，伸出伪足之类的。这个时候就是提示你留意他代了，这郃分细胞如再不佐代，很简单就老化掉，二、RAW264.7细胞传代1）将培内旧的培育液弃掉,然后用IHlanks液洗两次，（肯定要洗干净，以免影响胰酹的消化作用）含旧法含的红Hanks,含括读，不含解红IhHftnks,不含轲演含粉工D-nk不含的供不含mDPBS
15、不含磷不含跑PBS不含翻供不含麟红109PBS不含辆供不含酸红V1.C/1.1.Cz1.C/1.Cz1.J1.KftCl88888880K2KP0.12G00.1260.1280.1260.1262.92.929HaM2PO42X200000000BCl040.40.404020.22KK2F040.060.060.060.060.20.242.4他以M0.0980Oy00000CC120.140.140000OD-9fi三1111000戴红0.0100.010000流CNM030.350350.350.3500O2）加入0.25%物醉-EDTA消化.25Cm培育施加0.4ml,37度消化5m
16、in,镜卜看到细胞变圆,间隙墙大。（值得留意的是该细胞时机械损伤比较敏感）3马上加含KXuCS的培育液终止消化，用细胞刮刀轻刮，留意，这时候用吸管吹不下来，但是刮刀却很筒单刮卜来,而且对细脆的损伤微小4）离心，弃上清，加新的培行液（KnFCS）,当心吹匀，分装入新的培育瓶三、RAW264.7蜴胸冻存及复苏标楙赖噂,1献0,4j三,献磨靛式而踊e%渡展廊，醐l三谶三M蹄懒K觎懒腿聊磔跖雕耨蟒懈勒携嫡猴通（-细胞冻存1 .配制冰存培育液:（通用的为培育基：血清:DMSoq2:1,但其中的血消可进行调整，如上面的仁兄用的4：5；1,比例过高）2 .取对数生长期的细胞（冻存前一天换液）,用胰蛋白筋把单
17、层生长的细胞消化下来.恐浮生长的细胞则干脆将细胞移至15ml离心管中：3 .圈心100Orpm.5min；4 .去除胰蛋白的及IH的培节液,加入适fit配制好的冻存培育液,用吸管轻轻吹打残细府匀称，计数，调整冻存液中细胞的圾终密度为5X106mIXIO7/ml；5 .将细胞分装入冻存管中，将管11.5ml（不超过冻存管容量的够：6 .在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者：7 .冻存：标准的冻存程序为降温速率T-2/min；当温度达-25C以下时，可增至-5,C-10,Cin:到-100C时，则可快速浸入液葩中。也可将装有细胞的冰存管放入-20T冰箱2h,然后放入TOC冰箱中过夜,取出冻存
18、管,移入液短容涔内.（详细操作为4C20min.-20C30min.-70C过双,转入液氯中）（-细胞亚苏1 .从液翅容器中取出冻存管，干腌浸入37C温水中，井时常摇动令其尽快溶化。（Imin以内溶解完毕，不能将口进入水面卜2 .从37C水浴中取出浴存管,打开盖子,用吸管吸出细胞悬液.加到黑心管并滴加1。倍以上培汽液，混匀；3,禹心，1000rp三.5ain：3 弃去上清液，加入含10小牛血清培百液理抵细胞，计数.圜整细胞需度，接种培百粒，37C培臼箱舲留培方：（笈苏时细胞密度梢大，可提高复办效率）5.次H更换一次培育液,接着培百。（可更换一半培育液.避开跨度太大影响细胞状态接种总结下各料孔板
19、缆.咆接种量仅供参考细咆培养融（板林种僦生长面枳冬餐细脆数（大的）96板4-510435mm培养l10648孔板1.3IO560mm培养皿2.6X1062讥板2.5iO5100mm培养I1.7X10612孔板5105150mm培养Inll.8IO7用板1.2X106细咆精而枳容量T作体枳细胞数目I2.5cm225ml2ml5IO525cm250ml5mlIXIO635cm275mlIOml2X10675cm2250m)ISmI4IO6150cm2700ml40ml1.1X107补充：不同孔板所加培养液的液而都不宜太深，一般隹23mm范憎，结合不同孔的底面枳就可算出各培养孔的适宜加液量（参考下表
20、）.若加液量过多会影响气体（氧气）交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染.具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握.传代细胞接种密度及接种量参考Vessel-SiufaceAiea(CnP).5.0*103om26.0,1030w2totalvolumeofmedium96-well0.321600.1SOON24-Weik2.00。1.00XlO4.120XIO40.5-l(0.7p12well101。2.1042.40X101.12(1.5)6welk9.62。4.81104.5.56X102-3(2.560nun28.27p141XlO5.1.OX1053-5(5pT2525.00.1.2
21、3XlOV1.50X1054-5(5PT7375.OO3.75X104.5OX10512-15(15pTlf175.00.S-5105P1.05X10635-40(40p培养器Inp层面枳e）.力唉养磁三1.），可获细胞量“96孔培养板20.320.,24孔培养板。2，1.(P5XM】2孔培养板。4.2.(P*6孔培养板O9.晶2.525Xit”4孔培养板,2的5.g710t3.5ca培养皿/382ox*6cm培养Inb21“5.g5.2XM9cn培养皿/4X10.0“12.2X1*IOB培养mb，6,10.0,137104.25S塑料培养躺，235.851(T.75ca支抖培养殖,71533
22、21(f25Cm玻瑞培养版134.33t.100Ca玻瑞培养外.，37.310.0/61(f.260cn玻瑞培养瓶,2l.0j2X1啖2500CH旋转培养瓶700/10025025UTa四、RAw264.7的鹿形击不好时的处理方法1.例坤旧的培育基，加入3ml新的塔育基（无血清的都可）洗涤一次,用管吸走,然后再加入3ml的培f基，进行预吹打，限制吹打力度，轻轻地也许沿着瓶底过涧，然后吸走。这时候再起先正式的消化、吹打.2 .把吹打下来的细胞悬液加入到新的培育瓶内,培育就事先加入培育基.放入培育箱内培育，按时间点视察细咆贴壁状况，10分钟视察一次，20分钟，3。分钟视察一次。选择一个时间点,已经
23、有部分细胞岫碓的状况下.重新置于干净价底面朝上快速倒出其中的培行基，加入Ml新培育基用轻轻洗一次.然后加入完全培育基培讦.后续视察细胞生长状况以及形态。我称之为“.传”。3 .假如一次效果还不志向.可重更多次.出到找到细胞完备形态.其中要国意.结合细招感爱的生长状况.。爱多一点数中长得好的细胞就等贴壁细解比较多点的时候再传，反之亦然.RAW264.7细胞株CellCulture的材料（一）仪器1 .净化工作台2 .禹心机3 .恨M水浴箱4 .冰箱（49、-20C、-701C）5 .倒式相差显微镜6 .培育箱7 .液抵冰箱（一）跋璃）皿1 .吸管（弯头、点头）2 .培育瓶3 .玻璃瓶（250ml
24、.100mD4 .废液缸（三）塑料）皿1 .吸头2 .枪头3 .胶泥4 .移液管5 .15ml黑心管6 .冰存管（四）其他物品1 .微量加样枪2 .红血球计数板3 .记号宅4 .医用橡皮膏5 .移液枪（五）试剂1 .D-Hanks液2 .胎牛血清3 .培育液4 .双抗青带素、排称求）5 .映货白醉（0.25%）6.7.4%NaHCO37. DMSO（分析条）或无色嫉新甘油附1.胎牛血清品牌整理第一类，最高级别，是特地用于干细胞的特级胎牛血消1、HyClOne的特级胎牛血清目前，性能最好的血清，还是要说说Hyclone的特级胎牛血清，货号是SH30070.03,它是Hyclone的“招牌菜。Hy
25、clone特级胎牛血清（DefinedFBS）,货号SH30070,是世界上唯一经过40纳米过漉的顶级胎牛血清，极佳的促细胞生长作用及产品稳定性。内毒素含1OEUZmI,血红蛋白含量Slomgdl.此血清可以广泛用丁各种细胞培育，包含任何干细胞系的培育.2、GibCo的特级胎牛血清稍次点的是Gibco公司在美国原装生产的特级胎牛血清,这款血清，货号是16000-044,是WOnm过渡3次，内毒素和血红蛋白含忸:都可以及Hyclone的SH30070,03相媲美。也可以用于培育大部分的干细胞系。同样是美国来源，所以槃道特殊。3 .TCB的特级胎牛血清TCB（TissueCultureBiolog
26、icals）公司作为家生物行业类的闻名供应商，成立于1978年，大部分血清的采臾和加工都在加利福尼亚.每一批的原材料都经过严格筛选，全部的产品都在FDA认证的CGMP车间进行！4 .Bioind特优级胎牛血清血源来自北美和澳大利亚Biolnd公司的生产完全符合GMP的要求，并通过IS090002001和ISo13485:2003质量认证,以平安，稳定，高效为原则的Biolnd公司，全部的产品质量均完全符合国际标准。BiologicalIndustries主营细胞培禽类产品，Biolnd工厂加工的胎牛血清均符合USDA标准及欧洲标准血清。依据美国农业部标准，原始血清均采自未发生疯牛病（BSE）和
27、口蹄疫（FMD）疫情的国家。BiologicalIndustries一步灌菌处理法，最终的过渡步骤为连续通过三个100纳米的波膜。血清生产的干挣级别为100级。全部分装工作台都通过高效微粒空气过滤器过滤，并保持正压分装环境要对总微粒、悬浮微粒数和压力进行监控。分装之后，终产品快速-20度冻存，并隔底，直到全部的质量限制检测完成。其次类，优等胎牛血清1.Hyclone的加拿大优等胎牛血清性价比最高的是Hyclone加拿大优等胎牛血清（CharacterizendFBS）SH30396.03血清采自加拿大,由hycone公司总部的员工采集加工，采集方法.加工过程，检定标准及美国原产优等胎牛血清完全
28、一样，市场价格低于美国原产的。经过3次100nm过滤，内揖素含量425EUml,血红蛋白含量425mgdl2,HyClone的南美优级胎牛血清大体及加拿大的优等血清是一样的，级别也特别相像，货号是sv30087.02,该胎牛血清来源于南美洲，以封闭的心脏穿剌方式采集，产品经3次WOnm过温经严格检测确保无支原体，细菌病毒检测依据美国药典（USP）和美国联邦法规第九篇9CFR），内毒素含量SlOEU/ml,血九蛋白含量420mgdl,完全符介美国HyClone®优等胎牛血清的检测标准。3、GibCo的澳大利亚胎牛血清状况和Hyclone的澳大利亚胎牛血清差不多.市场价也是3200元/50
29、Oml左右。这一级别的血清，也能用于干细胞培育，可是，不象特级胎牛血消那么优秀。因为，此胎牛血清属于澳大利亚生产的，不在疫区，可以正常报关进口，目前没有受到任何影响，所以,就日前而言，算是最好的胎牛血清1.有不少客户都此血消来培育干细胞，效果还是比较不错。4, TCB的优级胎牛血清状况和Hyclone的澳大利亚胎牛血清差不多，市场价也是2300/c500ml左右。这一级别的血清，也能用于干细胞培育，可是，不象特级胎牛血清那么优秀。第三类，一般级别的进口胎牛血清1、Hyclone的南美胎牛血清目前，市场上用的最多的Hyclone血清是南美胎牛血清(FBS)SV30087,此血清采自南美，在国内(
30、兰州)过渡并测试检验，经三次100纳米过谑，依据中国商标法的规定标贴中文标签，内毒素含量OEUml,血红蛋白含量S20mgd此血清广泛用于各种肿痛细胞的培育，还没有资料记载能够用于干细胞，也听说有少数人用于干细胞培育的，不过，因为本身血红素比较高，所以，最好不要用于干细胞，2、Gib8的南美胎牛血清这款血清，是Gibs针对Hyclone南美胎牛血清做的，价格比较货，似乎是1780出500m,3、Gemini的胎牛血清4、TCB的胎牛血清5, PAA的胎牛血清6, JRH澳洲胎牛血清第四类，国产的各种系列胎牛血消国产的胎牛血清，国内没有严格意义的胎牛血清，胎牛血清本身是须要穿刺取血的，而国内都是
31、剖腹产出胎牛，8小时左右取血，然后，进行过滤分装。所以，国产的胎牛血清不是严格意义的胎牛血清。价格便宜但是遇到的问题特别多.附2.HyClone液体培育基一或液体培育若列表播述I先号I包装储存出收BMEMWS1MwliitmI：明C)EBSS*.含1.谷氨酸1.SHXH57.01500ml2eCoSH30157.02100OmI2-CDMEM*OuIbeccoSModifiedEagiCsMedium)含4.0mM1.谷氨的股.不含内雨酸ft*).SHXmiOIB50()ml2JTCSHIO2XFS6x500ml2eCSHIO21()2B1(MXml2的CSHxW22.1.S6x100()ml
32、26C高瞬,不含1.谷依僚胺及丙胴酸钠.SHMM)81Ol500ml2好C.SHXM)aFS6x500ml2.甲CSHXX8I.O2l11(X)ml2WCSH31.1.S6xI(NM)ml2KCoSHXJOS1.03201.袋装2序CoSH08lXMIo1.袋装2好C.含40mM1.谷氮傕胺、内阳酸钠.SH3O243.OIB500ml26CSH3243S6x500ml2甲CSH3O243.O2100OInl2印CSIHCH.1.S6xI(MX)ml2的CGSHao2433IO1.袋装2C-SH3O243.O4201.袋装2好C品哪,含1.谷氮罐胺、HnPn5.不含丙阳酸钠.SH30249.0I
33、50()ml2.甲CSH3024902100Oml2XC高班.不含梢、钱.SH3O22Q150()ml2eC-SH30262.02I(KXml2C扁轮，含1.-谷讽也胺，不含酚红及丙阳酸钠.SH3O284.OI500ml2甲CSH3O284.O2100OmI2好C而傩.台内粉酸讷,不含1.谷翅俄胺.21000ml2KC而辕.改良也.不含曲红，1.-谷显域胺,含内酸的.SH3QMHQ1500ml2序CSH3O6(M,O2100OmI2好Cff*.含内IW破的,不含1.谷氨处胺、甲M氮酸、就UWHWllSooml2KC-SH306.02100OmI26CttSft.台内解酸钠、25mMHEPES,
34、不含1.-谷Slft按，cSH30563.11l500ml2ZCcSH3O52l(MXmlzrcK*.含西S?酸钠,不含1.谷Uft胺瞬酸盐.SH30607.05ml2gC低轮，含4.0mM1.-答气黑胺、UO叫丙阳酸的，SH321.OIB500ml26CSH32IFS6x500ml2SCSI32I.O2l11(X)ml2gC32.50mM1.-谷版妣胺、15mMHEPES.SH3OO23.OIBSooml2的CSH3OO23.FS6x500ml26CSH3OO23.O2100OmI28C含HEPnS不含1.存氨条股.SH3OI26.OI500ml26CSH30I26.S6x500ml2gCc
35、SH30126.02100Oml2-S,C含1.谷坡俄脓、HEPES、WfWRM.SH3O261.O1500ml26CSH3O261.O2100Oml2eC含1.谷数成股，不含HEPn5.SH3O271.OI500ml2好CSH3O27I.FS6x500ml2甲CSH3O271.O2l(Xml2的C含1.谷如院脓.不含HEPES.阳红.SH302710150()ml26CSH3O272.O2100Oml2CHam,sJBWS(HanfsVutricntMixture)FitHiin*.含l谷殿SH3OO2-5.O50()mlzrcCSH30025.02l(MXml2笈CF12培育茶,含1.0O
36、mM1.由氨僦J*.IXSH3（三）26.(HBSoOml2CSH3QQ26.FS6x500ml26CSH326.O2100Oml26C外2塔白然.Kahns改良型。SH3O526.OI500ml2好CCSH30526.02100Oml2SCKJl*IinMxrlMEEiGrace、无添加剂增ff暴CSH30610.01500ml28CcSH30610.02l(KXml26CFNM-FH培白拈SH3O2O.O2500ml2ZCSH3O2M.O3100oml2甲CIMDMIftWtt(lsco*a9ModifiedllbcccosMedium)含1.-谷额酰胺、HEPES,不含-ffi代甘油.S
37、H3O22KO1B5CX)ml2aCSH3O228.FS6x500ml2WCSH3O22,O2100Oml26C不含1.-IfaftUESH3O259.OI50()ml2WCSH3025902100Oml2.甲C*ilnitzMWX(1.eiltUMedium)1.-l3JRft.含2.0SmM1.谷翅酸IK.SH3O52W500ml26CSH3O525.O2100OmI2好CMI991WS(Medium199)EBSS,含1.谷氨随胺.SH3253.OB50()ml2甲CCSH30253.FS6x500ml2-,CSH3O253.O2100OmIZ-S3CHBSS*.含1.谷乜根胺.cSH3
38、0233.0l100ml2好CCSH30233X2500ml2好CHBSS*.含1.谷UR股.1.Nt礼酸.)sti3ma50()ml2.甲CSH3OM.O2DOOmI2CMcCojSSAif*B!HcCoy1S5Medium)含1.-谷斌酸胺.SH30200.01500ml2CSH3112FS6x500ml2甲CSH3O2.O2l(MXmlzrc令1.谷坡院股.不含1红.SH3027001SDoml2的CoSH30270.02100oml2的C含1.-谷翅帙胺、HEPES.-SH30602.01500ml26C-SH3邈1.Q210(X)ml2好C：S3邈1.Q3ml2.gCMEMMWS(MinimumKwnttalMcdinm)EBSS.含2.0mM1.-谷UR帙.SH324.OIB5CX)mlscSH30024.FS6x500ml28CSH3OO24.O2100OmI2序CSH3241.S6x100OmI2WCRBSS*,含I.谷(ftt股，用于悬浮培仃.CSH30235Ql50()ml2rcoSH3023S.02
