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1、DNA亶组技术的基本工具作业姓名：班级：一、单选题1,卜列有关限制性内切核酸院的叙述，正确的是（）A用限制性内切核酸的切割一个DNA分子中部，获得一个目的基因时，被水解的磷酸二酯便有2个B限制性内切核酸的识别序列越短，则该序列在DNA中出现的概率就越大C.CATG1和一GlGATCe序列被限制性内切核酸酸切出的黏性末端可用DNA连接两连接D.只有用相同的限制性内切核酸酶处理含目的基因的片段和质粒，才能形成重组质粒2.如图表示DNA分子在不同酹的作用下所发生的变化，下列选项中，表示限制的、DNA聚合的、DNA连接随、解旋陶作用图解的正确顺序是（）Z=:二一=-=CA.B.C.D.3. 1.DNA
2、连接触可将任意2个具有相同黏性末端的DNA片段连接在一起“该反应过程需消耗ATP,其水解产生的腺仔一罐酸（AMP）通过共价健与酹相连，随后AMP转移至DNA片段，进而完成连接反应。下列叙述正确的是（）A. T,DNA连接酶的底物种类较多，故其无专一性B. %DNA连接施催化反应后，其组成成分已改变C. ATP在该反应过程中可能打开两个特殊的化学键D. T4DNA连接的需保存下最适湿度和pH条件下4.卜列有关重组DNA技术基本工具的叙述正确的是（）A. DNA聚合的是构建重组DNA分子必需的工具的B.不同的限制梯切割产生的黏性末端可能相同C相同黏性末端连接形成的DNA片段，定会被原限制的识别D.
3、运载体质粒常采用抗生素合成基因作为筛选的标记基因5.下图是研究人员利用供体生物DNA中无限增殖调控基因制备单克隆抗体的思路流程。下列叙述正确的是（）供钳的二H的基因一线体一1.施切后的我体由组DNA玲黑II跳单克隆抗体A.曲a、Mb作用位点分别为且键和磷酸二酯键B. I是经免疫的记忆细胞与骨能痛细胞融合的杂交瘤细胞C.筛选出既能无限增殖又能产生专一抗体的Il必须通过抗体检测D.上述制备单克降抗体的方法涉及转基因技术和动物细胞核移植技术6.某同学拟用限制醉（阱1、褂2、唧3和酬4）、DNA连接税为工具，将目的基因（两端含相应限制的的识别序列和切割位点）和质粒进行切割、连接，以构建重组表达载体。限
4、制前的切割位点如图所示.下列重组表达载体构建方案合理且效率最高的是（）IlII5GAArTC35GGATCC35CCCGGG-3,5,AGATCT-3,3CTTAAjG53CCTACMj53GGGCC53TcTA?5的S82酌3884A.质粒和目的基因都用的3切割，用GQDNA连接施连接B.质粒用的3切割、目的基因用筋1切割，用T4DNA连接醉连接C质粒和目的基因都川悔1和的2切割，用T4DNA连接的连接D.质粒和目的基因都用解2和酸4切割，用EaMDNA连接酶连接7 .用氨带青霉素抗性基因（Amp）,四环素抗性基因（TetR）作为标记基因构建的质粒如图所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同
5、限制的酶切后的质粒，构建琪因表达载体（重:组质粒，并转化到受体菌中。下列叙述错误的是（）A.若用HindHl梅切，目的基因转录的产物可能不同B.若用PVUl酶切，在含Tet（四环素）培养基中的菌落，不一定含有目的基因C若用SPhI梅切，可通过DNA凝胶电泳技术鉴定重组质粒构建成功与否D.若用SPhl的切，携带目的基因的受体薄在含AmP（氨苇青霉素）和Tet的培养基中就形成菌落8 .某小组通过PCR（假设引物长度为8个碱基短于实际长度）获得了含有目的基因的DNA片段，并用限制酶进行的切（下图），再用所得片段成功构建了基因表达载体。下列叙述错误的是（）III限制版Spe15-CTAGT-3NheI
6、5-GCTAGC-3,CfoI5,-GCGC-3,识别序列3-TGATCA-53-CGATCG-5,3-CXjCG-5,ttT扩增获得5,-agctagcaatgctcATCAACTCCGCA-3的DNA片段Jt-TCGATCGTTACGAGTACTTGACGCGT-SI.切5,-CTAGCAATGCTCATGACTGCG-33-GlCGGCKiC-5A.其中一个引物序列为5TGCGCAGT-3,B.步骤所用的酹是Spel和CfolC.用步骤的解对载体进行陶切，至少获得了2个片段D.前切片段和载体连接时，可使用ECOli连接的或T4连接的9 .卜列关于质粒的叙述，正确的是（）A.痂粒和真核细胞
7、DNA的基本组成单位不同B.质粒的复制过程是在受体细胞外独立进行的C质粒是存在于所有细胞中蛋白质合成的场所D.质粒是细胞质中能够自我复制的环状DNA分子10 .紫外线引发的DNA损伤,可通过“核昔酸切除修复（NER）”方式修复，机制如图所示。着色性干皮症（XP患者的NER陶系统存在缺陷，受阳光照射后，皮肤出现炎症等症状。患者幼年发病，20岁后开始发展成皮肤癌。卜列叙述中误的是（）A,修复过程需要限制酶和DNA聚合讷紫外浅SlllllllIIIII13B.填补缺口时，新链合成以5.到3的方向进行3，11II11111111-1C.DNA有害损伤发生后，在细胞增殖后进行修更，对细IIIIIIIll
8、lll33IIIlIlllIl15,胞最有利/加切口0)5rIliIJ,IIIrFTyD.随年龄增长，XP患者几乎都会发生皮肤癌的原因，可-IiiiiliIiliIil5,5TTttUT-T3用突变累积解释.341111IIJII11Wll-yII111I1III1I二、非选押题11 .如图为大肠杆菌及质粒载体的结构模式图,据图回答下列问题:(1)a代表的物质和痂粒的化学本的相同，都是.二者还具为其他共同点，如，(写出两条即可)。(2)若质粒DNA分子的切割末湍为一,则与之连接的目的基因切割末端应为可使用把质粒和目的基因连接在一起。(3)氨节青霉素抗性基因在质粒DNA上称为,其作用是(4)卜.
9、列常在基因工程中作为载体的是。A力：云金杆菌抗虫基因B.土填农杆菌环状RNA分子C.大肠杆菌的质粒D.动物细胞的染色体12.BamHI和BCII是两种限制曲，其识别序列及切割位点如下表所示.探究下列问题:限制一BamHIBcll识别序列及切割位点-Ogatcc-CCTAGG-1-TCATCA-ACTAG限制的(填能”或不能”)切割原核细胞自身的DNA试推测其理由是。(2)若某链状DNA分子中含有两个BamHI的识别序列，该DNA分子将被切成个片段,共断裂个璘酸二酯键。(3)请画出BCil切割后产生的末端,(4)BamHl和BCH切割后产生的舔性末端能否被DNA连接随连接?说明你的理ill(5)
10、为什么不同生物的DNA分了能拼接起来考答案：1. B【详解】A、用限制性内切核酸醉切割一个DNA分子中部,获得一个目的基因时,需要切制目的基因的两例，又因DNA为双舱结构因此要断裂4个磷酸二而耀.即被水解的磷酸二酯便有4个，A错误：B.限制前具有专-性，限制性内切核酸醮识别序列也短，则该序列在DNA中出现的概率就国大，B正确：C、一CATGl-和一GIGaTCC-序列被限制性内切核酸筋切出的拈性末端不同,分别为一CATG和GATC-.因此不能用DNA连接解连接.C错误：D、用不同的限制性内切核酸除处理含目的基因的DNA片段和质粒，若产牛的黏性末端相同，则也能形成电组筋粒.D拙误.故选B2. C
11、t详解】表示将一个DNA片段切割成两个，并且形成了粘性末端，需要用限制脚；表示新两个DNA片段连接起来，襦要用DNA连接的：表示解疑过程，需要用解旋陆；表示DNA更制过程,需要用DNA聚合版.C正确.ABD错误.3. C【详解】A.T,DNA连接艇有专一性,A错误：B.酬在催化反应前后性质不变，故TmNA连接前催化反应后，其组成成分不变，B错误；C.ATP水解产生AMP需要打开两个特殊的化学键，结合题干“该反应过程需高耗ATP,其水解产牛.的腺年一偌酸AMP）通过共价雄与熊相连可推测ATP在该反应过程中可能打开两个特殊的化学tC正确：D、T.DNA连接前需在低温和地适PH条件下保存，D错误，4
12、. B【详解】A、DNA连接命是构建重组DNA分子必需的工具的，A错误：B.不同的限制醉可能产牛.相同的黏性末筠，B正确；C.如假设限制解甲识别GAATTC跋基序列,并在GA之间切割,限制IW乙识别CAATTG城基序列,在C与A之间切割，形成的黏性末端是相同的，限制战甲与限制前乙形成的豺性末端连接后，形成的喊旗序列为CAATTC,另一条链为GAArrG,不能被限制群甲和乙识别，C播误：D、段体质粒通常采用抗生素抗性基因作为筛选标记基因，D错误.5. C【详解】A.ja,府b分别为限制筋.DNA连接陆.它们的作用位点均为璘酸二脑犍,Atft误：B、I是已先孩的B细胞或聚细胞中，B错误：C.筛选出
13、既能无限增殖又能产生专一抗体的H必须通过分子检测可以利用抗原-抗体杂交的方法,C正确：D、上.述制备单克降抗体的方法涉及裁域因技术和动物细究培养技术，D错误.6. C【详解】A、前3切割后得到的是平末端，应该用T4DNA连接险连接，A错谡；B、质粒用前3切割后得到平末端，目的基因用脚I切割后得到的是黏性末玷，二者不能连接，B错误：C,C粒和目的基因都用篇1和r2切割后得到黏性末螭,用T4DNA连接醐连接后,还能保证目的基因在质粒上的连接方向，此质殂去达我体的构建方案最合理且高效，C正确；D、若用的2和筋4切割质粒和目的基因.会破坏质粒上的抗生素抗性基因.连接形成的基因表达载体缺少标记基因，无法
14、进行后续的筛选.D错误.7. D【详解】A、若用Hindnl侪切.目的基因可能正向插入，也可能反向辅入,转录的产物可旎不同,A正确.B.若用PVUl班切，JR殂顺粒和质粒中都有四环素抗性基因（TcF）,因此在含的（四环素）培养基中的的落，不一定含有目的基因，B正确：C.DNA凝胶电泳技术可以分离不同大小的DNA片段.虫组质粒的大小与质粒不同,能够超定重组质粒构建成功与否，C正确：D、SPhI的筋切位点位干四坏索抗性基因中,若用SPh1而切.重组防粒中含氨甘百毒素抗性基因（AmPR）,因此携带目的基因的受体面在含AmP（叙出青般素）的培务基中能形成菌落，在含Tct的培养基中不能形成曲落.D将误。
15、8. B【详解】A、由于引物只能引导子链从5到3,根据被册互补归时原则，其中一个引物序列为5TGCGCAGT-3.AlE确：B、根据：种的的触切位点,左他的黏性末第是使用NhCI切割形成的,右边的黏性末端是用CfQl切割形成的，B错误:C用步骤的版对城体进行梅切.使用了NhCl和CfN进行切割,根据他们的识别位点以及原本DNA的序列,切割之后至少获知了2个片段，C正确：D.图中形成的足黏性末端，而ExoIiDNA连接酪只能连接黏性末端：TmNA连接的既可连接平末端,又可连接拈性末端.D正确.故选B,9. D【详好】A、质粒是独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外,并具有自我复制能力的环状
16、双跳答案第2页,共4页DNA分子，组成胞位与其核细胞的DNA完全相同，椰是脱氧核甘酸,A错误：B、质粒作为基因工程的我体，可以进入受体细胞迸行自我配制，B错误；C.细胞中蛋白麻合成的场所足核糠体,C错误：D、肪粒是细胞质中能修自我更制的环状DNA分子.主要存在.于原核细胞中,D正确.10. C1详解】A、由图可知,修史过程中需要构损伤部位的序列切断，因此需要限制傍的参与：同时修兑过程中，单个的脱氧核甘酸需要依次连接，要借助DNA聚令前，A正确;8. B补缺口时,新链即子族的延伸方向为S到3,的方向进行,B正确:C、DNA有害损伤发生后，在细胞塔处中诳行修史,保证DNA发制的正确进行，对细胞最有
17、利，C错误:D、睡症的发生是多个基因素枳突变的结果，班年龄增长，XP患者几乎都会发生皮肤娓的原因，可用突变累积解弊.D正确.故选CII.(1)DNACGCGT-A-能够自我史制具有遗传效应DNA连接他(3)标记法因用于球组DNA的鉴定和选择(4)C【详解】(I)a代表的物质是大型环状DNA分子,质粒是一种裸殂的、结构筒单、独立于细菌拟核之外的小型环状DNA分子，两者都能自我复制,并菰含遗传信息.2)麻粒DNA分子的切割末玷和与其能第连接的目的基因切割末桀之何能的发生破脑目.补配对，若麻粒-ACGCGT-DNA分子的切割末端为TGCG1.则与之连接的目的基因切割末湍应为A-可使用DNA连接科将它
18、们连接在一起.(3)质粒DNA分子上的秘苫有毒素抗性基因可以作为标记基因，便于对术殂DNA进行魏定和筛选.4)A,苏公金芽胞杆曲抗虫塞因一般作为目的法因，A错误：B.土塔农杆菌环状RNA分子不容易在宿主细胞内保存.B错设：C、常用的教体有防粒、噬曲体、动植物病毒等，C正确：D、动物细恂染色体的主要成分是DNA和货白质,不能被限制性核酸内切脚切割，因此不能用作战体，D悟误：12.(I)不能原核细胞DNA中不存在限制前的识别序列或能被识别的序列被修饰了-TGATCA-(2)34(3)-ACIAGT-(4) 能二者切割后产生的粘性末端相同,可被DNA连接陆连接.(5)DNA的基本组成单位都处四种脱翅
19、核甘酸：双倍DNA分子的空间结构椰是规则的人爆旋结构：DNA分子都遵循以域互补配对原则。(详解】(I)限制帧能切割外源DNA.不能切割原核细胞自身的DNA.其可能的原因是原核细胞DNA中不存在限制酹的识别序列或能被识别的序列被修饰了。(2)若某链状DNA分子中含有两个BamHI的识别序列，若用限制醉BamHI识别并切割，则该DNA分子将被切成3个片段，共断裂4个磷酸二而裸，每个识别序列被切割的过程中会断裂2个硝酸二酯迸.(3)表中信息可知BCIl的识别序列为TGATCA,且在T/G之间切开，则切割后产生的序列为TGATCA-ACTAGT-4)BamHl和BCIl切割后产生的黏性末端相同，均为CTAG,可见这两种限制陶切割产生的黏性末端能被DNA连接侪连接.(5)不同生物的DNA具行相同的基本总位，即四种脱氧核甘酸，且双StDNA的空间结构相同，均为双娜加结构，且不同生物的DNA分子都遵循相同的碱地互补配对潦则，因此，不同生物的DNA分子能在相关法的催化下拼接起来.
