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1、检验样本采集手册第一章检验标本采集总则1 .目的对检验申请、患者的状态、临床标本的采集与运输过程等各环节进行控制以保证分析前标本的质量。2 .范围适用于检验科受理的标本3 .职责3.1 临床医师负责检验项目的申请，医护人员负责临床标本的采集以及指导患者如何正确留取标本。特殊标本由临床医生采集。3.2检验科工作人员负责部分标本采集，并提供标本采集、运送等的相关咨询服务。4 .工作程序4.1 检验申请4.1.1 检验项目选择临床医师根据患者病情需要和检验项目的敏感度、特异性来正确选择检验项目；检验科人员可为临床提供检验项目的咨询，帮助合理选择检验项目。4.1.2 检验申请单4.1.2.1 纸质申请
2、单检验申请单填写应包括以下内容:a）患者的唯一性标识：包括患者的姓名、性别、年龄、住院的科别、床号、住院号、初步诊断等；b）样本类型；C）申请检验项目或项目的组合；d）申请日期；e）申请者姓名。4.1.2.2 HIS申请临床医生只需在HIS的检验申请单中点击相应的组合项目即可自动生成上述要求的内容。4.1.3 检验申请单中的特别说明：a）对检验项目的特别要求,如注意细胞形态等；b）特殊传染病病人标本（如HIV,霍乱等）应在检验申请单上注明。4.2 患者状态患者状态是影响检验结果的内在的因素，包括固定因素和可变因素两个方面。4.2.1 固定的因素如年龄、性别、民族等，他们的参考区间是不同的。分析
3、前阶段的质量保证工作考虑的主要不是这方面的因素。4.2.2 为了使检验结果准确可靠，临床医护人员和检验人员应了解标本收集前影响检测结果的非病理性因素，如饮食、标本采集时间、体位和体力活动、情绪状态、病人用药等对标本采集的影响。要求患者予以配合的内容，采取切实措施,保证采集的标本符合疾病的实际情况。原则上患者应在平静、休息状态采集标本，尤其是血液标本。4.3 临床标本采集程序4.3.1 采样人员采样人员必须经过培训合格后，方可进行采样，对于患者自行收取标本，须接受专业人员的指导。4.3.2 采样准备在采样前，采样人员根据申请者申请的检验项目的要求，在HIS中打印检验条码绑定在相应的容器上。要注意
4、样品标识必须与检验申请单相符合，严防标记错误。433采样实施（静脉血、动脉血、末梢血、足跟血等）采样人员必须根据检验项目的要求和计划以及医嘱要求执行的时间，选择恰当的部位，按相应标本采集的作业指导书采取适当的样品量。4.4 标本收集、运送与储存4.4.1 每天早晨病房采集标本后，按标本的种类分别放在指定的位置，标本放置处应有明显的标识并符合生物安全的要求。4.4.2 实验室负责收集标本的工人核对标本后，将标本转入专用的、密闭无渗漏的标本运输箱内。运输箱内试管架应可靠固定，以防盛装体液的试管发生泄漏。4.4.3 检查运输箱盖是否已完全盖好，确认后将标本运送至实验室。按检测项目分别分送至各专业组。
5、4.4.4 标本转运途中如果发生泄漏，应立即按生物安全应急预案的相关条款进行处置并进行书面记录。4.4.5 定期对运输箱内壁和表面进行消毒处理。4.4.6 标本采集后应及时送检。4.4.7 本实验室主要对以下标本进行储存：生化组检测项目对不能及时完成检测的标本放置2-8C冰箱保存，不超过二天；免疫组检测项目对不能及时完成检测的标本放置2-8。C冰箱保存,不超过二天。生化组完成检测的标本放置标本架上,放入专用标本存放冰箱（2-8）保存3天，以备复查；免疫组完成检测的标本放置标本架上，放入专用标本存放冰箱（2-8。C）保存7天，以备复查；血液组检测标本完成检测后血型标本室温保存7天,其余项目室温保
6、存24h;分子生物学标本完成检测后血液原始标本置于2-8冰箱保存7天,体液、组织原始样本置于-20。C冰箱保存7天；HBVxHCV除保留原始样本外还应分离血清或血浆样本进行唯一编号（采用样本自身唯一编号）后-20或-80。C保存3个月,其他样本的DNA提取物置于-20或-80。水箱冻存一个月，对检验结果有疑问、或有争议、或被投诉时，取用存放标本进行复检。4.5 临时申请附加或删除检验项目临床需要临时申请附加或删除检验项目时，应与检验科联系并告之原因，经同意后实施。4.6 抗凝剂选择4.6.1 含有K+、Na+的抗凝齐怀能用于测定K+、Na+的标本。4.6.2 EDTA,氟化物、草酸盐等不能用于
7、测定Ca2+的标本，因为Ca2+可与它们形成不溶性物质。4.6.3 草酸盐、氟化物不能用于测定酶和用酶法测定的标本，因为它们有激活或抑制某些酶活性的作用,如草酸盐可抑制AMY、ACPxLDH的活性，氟化物则有激活尿素酶、AMY的作用。4.6.4 草酸钾氟化钠混合抗凝剂：专供葡萄糖测定用，氟化钠1g,草酸钾3g,混合剂4mg抗凝Iml血。4.6.5 肝素：是一种粘多糖体，可抑制凝血酶原转化为凝血酶，使纤维蛋白原不能转化为纤维蛋白。以152.5IU抗凝血液Imle肝素抗凝血不影响红细胞体积,可用于生化及血液学检验标本，但不可用于筛选DlC的3P和TT试验,因肝素与鱼精蛋白作用，发生沉淀，使3P出现
8、假阳性以及肝素的抗凝血酶作用产生干扰。4.6.6 EDTA与钙离子络合而抗凝通常血液学常规检验应用其钾盐EDTA-K2.EDTA-K3o4.6.7 使用抗凝剂要注意血与抗凝剂的比，如血沉取106mmolL的枸椽酸钠0.4ml,抽1.6ml血;凝血象枸椽酸钠0.2ml,抽1.8ml血；血常规用EDTA抗凝管抽1.5ml血；血生化用肝素抗凝管抽3ml血等。4.7 警告：潜在的生物危害性所有采集的标本都应视为具有潜在的生物危害性。对此类标本处理都应遵循本科室生物安全相关规定。5 .临床检验标本拒收准则5.1 标本容器和/或检验申请单上信息不符或缺失5.1.1 标本容器无标识、标识不清、样本与申请单上
9、信息不符、申请单信息缺失（包括患者唯T4标识及检测项目缺失）。5.1.2 检验申请单送检项目检验科未开展。5.2 标本不合要求5.2.1 未使用合适标本容器，标本容器破损、渗漏，抗凝剂选择不当，标本类型不当，标本采集后保存不当等。5.2.2 中度以上溶血、脂血，抗凝血中有凝块，量不够，距离检验时间过长等。5.2.3 体液不能用一次性注射器抽取后送检,体液常规用紫色抗凝管,体液生化、免疫用黄色促凝管,体液一般细菌涂片，结核杆菌涂片置于无菌杯中送检。6 .让步检验对极难获得的标本（如新生儿、重度烧伤病人、休克病人）所致的标本质量不符合检验要求（如量不够、溶血等）时，检验科可以做让步检验，提示所得结
10、果仅供临床医生参考。第二章一般检验标本采集（一）静脉血采集1.紫头管标本采集（血常规、肾素醛固酮、网织红细胞、疟原虫、微丝坳ABO.RH血型、糖化血红蛋白、地中海贫血筛查及基因分型、人类白细胞抗原B27测定、血儿茶酚胺等）1.1血常规1.1.1 标本采集及量用帽盖为紫色的真空负压管（EDTA-K2抗凝）采集静脉血至2ml刻度,立即轻轻颠倒混匀5次，采集后尽快送检。1.1.2 注意事项a）防止标本溶血。b）应与抗凝剂充分混合,应避免剧烈振摇。c）抽取标本时不能从输液管中或输液部位的同侧静脉采血。d）标本室温保存不得大于4小时。e）患者的活动情况和精神状态、药物、年龄、性人标本采集时间等会影响检测
11、结果。故采血前因使患者尽量减少运动以保持平静。1.2 肾素醛固酮1.2.1 标本采集及量用帽盖为紫色的真空负压管（EDTA-K2抗凝）采集静脉血至2ml刻度，立即轻轻颠倒混匀5次，记录采血时间，采集后尽快送检。1.2.2 注意事项a）卧位：病人需在平静状态下平卧2小时采血。b）立位：病人需在平静状态下站立2小时采血。C）切忌不能将标本放于2-8。C冰箱放置。1.3 AB0、RH血型13.1标本采集及量用帽盖为紫色的真空负压管（EDTA-K2抗凝）采集静脉血至2ml刻度,立即轻轻颠倒混匀5次，立即送检。1.3.2注意事项a）采血部位皮肤应完整，无烧伤、冻疮、发绢、水肿或炎症等。b）穿刺皮肤要有一
12、定深度，不要用力挤压采血部位，避免组织液混入。C）由于采血量较少，主要用于门诊或/和急诊病人的血常规检测。d）乙醇消毒皮肤待全干后方可采血，否则流出的血液不呈圆滴状，可导致溶血。1.4 网织红细胞、疟原虫、微丝蜘检查1.4.1 标本采集及量用帽盖为紫色的真空负压管（EDTA-K2抗凝）采集静脉血至2ml刻度，立即混匀。1.4.2 标本送检要求记录采血时间,采集后尽快送检。1.4.3 标本采集时机的特殊要求a）微丝坳采血时间以新鲜全血抗凝血（推荐使用EDTA抗凝），夜间9:00至次晨2:00时采血。b）疟原虫分为间日疟原虫、三日疟原虫、恶性疟原虫、卵形疟原虫四种，间日疟宜在发作后数小时采血；恶性
13、疟在发作初期可见大量环状体,一周后可见配子体。1.4.4 注意事项静脉血与抗凝剂应充分混合,避免剧烈振摇。1.5 糖化血红蛋白1.5.1 标本采集及量用帽盖为紫色的真空负压管（EDTA-K2抗凝）采集静脉血至2ml刻度,立即轻轻颠倒混匀。1.5.2 标本送检要求采集后尽快送检。1.6 地中海贫血基因分型1.6.1 标本采集及量用帽盖为紫色的真空负压管（EDTA-K2抗凝）采集静脉血至2ml刻度，立即轻轻颠倒混匀。1.7 人类白细胞抗原B27测定1.7.1 标本采集及量用帽盖为紫色的真空负压管（EDTA-K2抗凝）采集静脉血至2ml刻度，立即轻轻颠倒混匀。2 .蓝头管标本采集（凝血四项及凝血全套
14、、血小板相关抗体测定）2.1 凝血项2.1.1 标本采集及量用帽盖为蓝色的真空负压管（枸椽酸钠1:9）采集空腹静脉血至2ml刻度，立即轻轻颠倒混匀5次。2.1.2 标本送检要求记录采血时间,采集后尽快送检（凝血试验应于4小时内完成），避免高温下送检。2.1.3 注意事项a）抽血顺利、不应有溶血和凝血，血液与抗凝剂应充分混匀，避免剧烈振摇，采血后立即送检不宜久置。b）某些药物（如抗凝类药物）会对凝血象检测结果有影响。3 .黑头管标本采集（血沉）3.1 血沉3.1.1 标本采集及量用帽盖为黑色的真空负压管（枸椽酸钠1:4）采集空腹静脉血至2ml刻度，轻轻颠倒混匀5次，室温保存。a）采集足够量的血液
15、标本，采集量在两个刻度线之间。b）及时送检，采血后3小时内检测完毕。C）存放时间超过3小时的样品，结果会有假性增加。4 .绿头管标本采集（微量元素、血流变等）4.1 微量元素4.1.1 标本采集及量用帽盖为绿色的真空负压管（专用耗材）采集空腹静脉血至3-5ml刻度,轻轻颠倒混匀5次，采集后尽快送检。4.1.2 注意事项用肝素抗凝管（绿帽）,严格防止标本有凝集,及时送检。4.2 血流变421标本采集及量用帽盖为绿色的真空负压管（肝素抗凝）采集空腹静脉血至4ml刻度，轻轻颠倒混匀5次，室温保存。4.2.2注意事项用肝素抗凝管（绿帽），严格防止标本有凝集，及时送检。5 .黄/红头管标本采集5.1 生
16、化项目（肝功、肾功、血脂、血糖、电解质、血淀粉酶、心肌酶谱、风湿全套、补体抗体、降钙素原等）5.1.1 标本采集及量用帽盖为黄色的真空负压管（促凝剂）采集空腹静脉血至3-5ml刻度.轻轻颠倒混匀5次，采集后尽快送检。5.1.2 注意事项a）标本避免溶血、脂血,压脉带压迫时间不得超过一分钟,混匀时避免剧烈振遥，避免全血直接低温冻存及反复冻融，避免室温长时间放置。b）多种药物，如抗癫痫药、某些抗生素可使某些酶的活力升高。C）饮食的方式、年龄、性别等生理性因素对TG水平影响均较大，不同年龄血清的碱性磷酸酶活性差异大，剧烈运动或妊娠使碱性磷酸酶活性升高。d）空腹采血e）糖耐量实验需空腹IO-16小时后
17、，抽取静脉血，测定血葡萄糖浓度,将75g无水葡萄糖溶于250-300ml水中,5分钟之内饮完,期间不可喝咖啡、浓茶、吸烟或进食，儿童按1.75gkg体重计算口服葡萄糖用量，总量不超过75g,服糖后，每隔30分钟、1小时、2小时、3小时分别采集一次静脉血。5.2 免疫项目（HIVx梅毒、甲肝、乙肝、丙肝、丁肝、戊肝、结核抗体、幽门螺旋杆菌、优生优育、自身抗体类等）521标本采集及量帽盖为红色的真空负压管（促凝剂）采集静脉血至3-5ml刻度，轻轻颠倒混匀5次，采集后尽快送检。5.2.2注意事项a）标本避免溶血、脂血、反复冻融。b）结果为阳性或可疑时应进行随访。C）HIV初筛结果：HlV抗体待复查，
18、通知患者复印身份证及联系方式,现场核对身份信息后，采集第二次血样，若检测结果为HIV抗体待复查，送第二次血样到疾控中心做确诊实验；结果回报日期为10个工作日。d）标本要求：血清标本应新鲜，血清分离后置于2-8。C须在48小时内使用，超过48小时应置于-20。C保存，尽快送检。5.3 化学发光项目（肿瘤标志物、性激素、唐氏筛查、甲功、C肽、皮质醇、BNP.PTH等）5.3.1 标本采集及量用帽盖为红色的真空负压管（促凝剂）采集空腹静脉血至3-5ml刻度，轻轻颠倒混匀5次，采集后尽快送检。5.3.2 注意事项a）标本避免溶血、脂血、反复冻融。b）标本要求：血清标本应新鲜，血清分离后置于2-8。C须
19、在48小时内使用，超过48小时应置于-20。C保存，尽快送检。C）接受生物素或者链霉亲和素治疗的患者对本检测结果有较大的影响5.4 EB病毒4项5.4.1 标本采集及量用帽盖为红色的真空负压管（促凝剂）采集空腹静脉血至3-5ml刻度，各项不单独检测。6 .特殊类:真菌G实验、内毒素、结核T细胞、胎儿染色体非整倍侬T21/T18/T13）筛查）6.1 真菌G实验、内毒素、结核T细胞6.1.1 标本采集及量真菌G实验和内毒素检测用帽盖为红色的真菌G专用管采集空腹静脉血至3-5ml刻度，结核T细胞检测用绿色T细胞BD专用管采集空腹静脉血至4ml刻度,轻轻颠倒混匀5次，采集后尽快送检。6.1.2 注意
20、事项a）标本避免溶血、脂血、反复冻融。b）标本要求：血清标本应新鲜，置于2-8。：须在48小时内使用，超过48小时应置于-2（C保存，尽快送检。6.2 胎儿染色体非整倍体（T21/T18/T13）筛查621标本采集及量EDTA抗凝管5ml或StreckCeII-FreeDNABCT采血管5mloa）标本避免溶血、脂血、反复冻融。b）采血管需在产科医生处领取，周一至周六采集标本。C）要用专科专用申请单，信息填写全面，以便诊断和留档。e）在采集标本时询问患者是否正在服用抗生素过程中,是否大量饮酒或有酗酒习惯等对外周血培养效果会产生较大影响的因素，尽量避免此类因素。6.3 骨代谢、登革热、高血压检查
21、6.3.1 标本采集及量骨代谢、登革热检查用帽盖为红色的真空负压管（促凝剂）采集空腹静脉血至3-5ml刻度,采两管送检；高血压检查患者采集两管紫管（EDTA抗凝）,记录患者采血姿势（立/卧位）。（二）动脉血采集1 .血气分析1.1 标本采集及量皮肤严格消毒后，穿刺股动脉、肱动脉或横动脉，用2ml专用血气注射器按无菌手术原则抽取l-2ml,动脉血压力推动空针活塞，不能有气泡。抽出后取下针头盖好，隔绝空气。将注射器放在手中，来回搓动，立即送检。1.2.1 填写血气分析申请单时要求写出病史、诊断、用药情况、抽血时的体温、是否用氧及其流量,为分析检测结果提供依据。1.2.2 每管l-2ml由医护人员采
22、集，及时送检，如不能及时送检应放入冰水中保存（一般可保存2小时），注意切勿用冰块，以避免破坏红细胞而溶血。（三）末梢血采集1 .血常规+CRP1.1 标本采集及量用75%的酒精消毒手指端或耳垂部位，待消毒液干后用一次性采血针刺入皮肤，将第一滴血拭去，轻轻挤压采血部位，用一次性微量吸管采集血液少许（120）注入装有抗凝剂的PE管中,轻轻吹打混匀，盖紧管盖,水平放置IO分钟后进行检测。特殊患者（如烧伤、婴幼儿）必要时可从足跟部两侧的中部或后部或大拇指采血，针刺深度不应超过2mmo2 .微量元素2.1 标本采集及量用75%的酒精消毒手指末端或耳垂部位，待消毒液干后用一次性采血针刺入皮肤，将第一滴血拭
23、去，轻轻挤压采血部位，用一次性微量吸管采集血液少许（准确采集至40l刻度），轻轻打入采集微量元素专用的子弹头内，颠倒混匀5次，采集后尽快送检。（四）体液标本采集1.尿液理化检查1.1 标本留取时间1.1.1 收集常规尿液分析的尿标本：应留取新鲜尿，以清晨第一次尿为宜，较浓缩,条件叵定,易检出异常,便于对比。1.1.2 收集急诊患者尿液分析的尿标本：可随时留取（随机尿）。1.1.3 收集特殊检验尿液分析的尿标本a）收集计时尿标本：应告知患者留尿起始和终止时间；留取前应将尿液排空，然后收集该时段内（含终止时间点）排出的所有尿液。b）收集使用防腐剂的尿标本：应建议患者先将尿液收集于未加防腐剂的干净容
24、器内，然后小心地将尿液倒入实验室提供的含防腐剂容器中。c）收集多项检测尿标本：应针对不同检测项目分别留取尿标本（可分次留取，也可一次留取分装至不同容器中）。d）收集特定时段内尿标本：尿液应保存于2-8。（:条件下。e）收集时段尿尿标本：如总尿量超过单个容器的容器时，须用两个容器，检测前必须充分混匀两个容器内的尿液,最常用的方法是在两个尿容器之间来回相互倾倒尿标本；第二个容器收集的尿量T殳较少,故注意加入防腐剂的量相应减少。f）收集卧床导尿患者的尿标本：将尿袋置于冰袋上；如患者可走动，应定期排空尿袋，将尿液存放在2-8。C条件下。1.1.4 尿液防腐与保存1.1.4.1 通常，尿标本采集后应在2
25、小时内完成检验，避免使用防腐剂；如尿标本不能及时完成检测，则宜置于2-8摄氏度条件下保存，但不能超过6小时，（微生物学检查标本在24小时内仍可进行培养）。根据检测项目特点，尿标本可采用相应的防腐剂防腐,而无需置冰箱保存。1.2 各种尿标本采集与量1.2.1 晨尿：以首次晨尿或第2次晨尿为宜,可用于尿液形态学和化学成分分析（尿常规、尿HCG等），采集量IOmL急诊和门诊病人可留取随机中段尿送检。1.2.2 餐后尿：通常收集餐后2h的尿液，这种标本有利于检出病理性糖尿、蛋白尿或尿胆原,主要用于了解葡萄糖代谢情况。1.2.3 24h尿：患者上午8时排尿一次，排空膀胱,此后收集各次排出的尿液,直至次日
26、上午8时最后一次排尿的所有尿液，记录总尿量，取第一次尿后加入防腐剂（浓盐酸）混匀后取适量送检。主要用于分析如肌酊、儿茶酚胺、17羟、17-酮、总蛋白、电解质，尿结核菌等检查。1.2.4 尿三杯：多用于男性下尿路及生殖系统疾病定位初步判断。13标本送检要求用清洁的一次性容器随时留取中段尿液，收集于尿液试管中,容器应清洁有盖，明确标记,记录留取时间及时送检。141避免经血、白带、精液、粪便等混入。1.4.2采集后立即送检，避免细菌繁殖、细胞溶解等。1.5标本送检要求采集后尽快送检。2.24小时尿蛋白定量2.1 标本采集及量2.1.1 患者可留取晨尿或随机中段尿5-10mlz收集于清洁有盖容器内。2
27、.1.2 留取24h尿,记录总体积,混匀后取5-10ml于清洁容器中并注明尿量。注意在收集24小时尿时需加入防腐剂（100Oml尿中加5ml甲苯）。2.2 标本送检要求采集后尽快送检。2.3 注意事项a）在整个留尿过程中，按平时正常饮水，停用利尿剂。b）避免剧烈运动。C）在整个留尿过程中，留尿容器须放置在冰箱内。3尿微量白蛋白/尿肌酊3.1 标本采集及量3.1.1 患者可留取晨尿或随机中段尿5-10mlz收集于清洁有盖容器内。3.2 标本送检要求采集后尽快送检。3.3 注意事项a）避免剧烈运动。4粪便标本采集与处理4.1 常规检验采集及量采集粪便的方法因检查目的不同而有差别，如常规检验留取新鲜
28、指头大小（约5g）即可，放入干燥、清洁、无吸水性的有盖容器内送检。不应采取尿壶、便盆中的粪便标本，应标本中混入尿液和消毒剂等，可破坏粪便的有形成分，粪便标本检测时，应选择其中脓血粘液等病理成分，若无病理成分可多部位取材，采集后应在1小时内完成检查，否则可因PH及消化酶等影响，使粪便中细胞成分破坏分解。4.2 寄生虫检验采集及量粪便必须新鲜，送检时间一般不宜超过24小时，如检查肠内原虫滋养体，应于排便后立即送检，立即检查。冬季需采取保温（35-37摄氏度）措施。血吸虫毛坳孵化应留新鲜便,不少于30go检查寄生虫体及虫卵计数，须用洁净、干燥的容器，并防止污染；粪便不可混入尿液及其他体液等，以免影响
29、检查结果。43化学检验采集及量采用化学法做隐血试验应嘱患者于收集标本前3天气禁食动物性和含过氧化物酶类食物（如萝卜、西红柿、韭菜、木耳、花菜、黄瓜、苹果、柑橘、香蕉等），并禁服铁剂和维生素C等，以免假阳性反应,连续检查3天，并选取外表及内层粪便；收集标本后须迅速送检,以免因长时间放置使隐血反应的敏感度降低。5其它体液标本留取与采集5.1 前列腺液标本5.1.1 标本采集前禁欲3天：若一次采集失败或检查结果为阴性但临床指征明确者，可于3-5天后复查。5.1.2 采集方式：由临床医生行前列腺按摩术采集。一般用于慢性前列腺炎症；疑有前列腺急性炎症、脓肿、结核或肿瘤且压痛明显者，应慎重采集标本。按摩时
30、用力要均匀适当,并按一定方向进行,避免因反复强力按压造成不必要的损伤。5.1.3 所用容器：采集于清洁玻片上或无菌广口容器内。采集时应弃去流出的第一滴前列腺液，并立即送检。5.2 精液标本5.2.1 在临床医生指导下患者自行采集。采集前禁欲时间：27天；如需多次采集标本，每次禁欲时间天数均应尽可能一致。3个月内至少应检查2次，2次间隔时间7天,但不能超过3周。5.2.2 采集方式：手淫法（最为理想的方法）；应将一次射精精液全部送检。如标本不完整，应在检验报告中注明。5.2.3 所用容器：使用专用或指定清洁干燥广口带刻度容器；5.2.4 室温保存：2037oCo采集后应立即保温送检,送检时间不超
31、过30分钟。5.3 阴道分泌物标本5.3.1 采集方式：由临床医生负责采集，一般采用生理盐水浸湿的棉拭子于阴道深部或阴道后穹隆、宫颈口等处取材，标记采集部位，采取标本后应立即送检。5.3.2 所用容器：使用专用采集管或一次性棉拭子。5.3.3 注意事项：检测滴虫应立即送检，冬季需采取保温措施。月经期不宜进行阴道分泌物检验。5.4 脑脊液标本5.4.1 采集方式：由临床医生严格无菌操作采集，一般行腰椎穿刺。必要时从小脑延髓或侧脑室穿刺采集。5.4.2 采集容器：分别收集每管l-2mlo脑脊液培养：第一管CSF先收集于广口无菌培养杯中，对儿童瓶盖严格无菌消毒后,用注射器抽取无菌杯中CSF打入儿童瓶
32、中，及时送检。脑脊液生化及免疫：第二管CSF收集于黄头管中，立即送检。脑脊液常规检查：第三管CSF收集供细胞学检查，置于帽盖为紫色的抗凝试管中，记录留取时间立即送检，不超过1小时。5.5 浆膜腔积液标本5.5.1 包括胸腔积液、腹腔积液、心包积液、关节腔积液，由临床相关科室医生穿刺获取。采集标本分三管留取，每管l-2mlo浆膜腔积液培养：第一管供细菌学检查，穿刺后的液体注入到瓶盖消毒后的儿童瓶中。浆膜腔积液生化：第二管供生化及免疫学检查，置于黄头管中。浆膜腔积液常规检查：第三管供细胞学检查，置于帽盖为紫色的抗凝试管中。5.5.2 注意事项：若无法及时送检,可加入10%乙醇置于2-4。C保存,不
33、宜超过2小时。5.6 胃液标本标本采集：由临床医生采集。取胃液于广口无菌培养杯中立即送检。5.7 支气管肺泡灌洗液标本采集：由临床医生行纤维支气管镜检时采集。采集后置于无菌专用容器中立即送检。5.8 痰液标本5.8.1 标本采集：嘱患者晨起用0.9%生理盐水漱口后用力咳出1-2口痰液（咳出深部痰液）。5.8.2 标本容器：置于广口无菌容器内，及时送检。5.8.3 注意事项：痰液标本收集法因检验目的不同而异，主要用自然咳痰法。a）一般收集新鲜痰，以清晨第一口痰为宜。用力咳出气管深处呼吸道分泌物，勿混入唾液、鼻咽分泌物和漱口水，及时送检。适用于常规检验、一般细菌检验、结核菌检查。b）细胞学检查用深
34、咳痰液及时送检，应尽量送含血痰液。C）浓缩法找抗酸杆菌应留24小时痰（量不少于5ml）,细菌检验应避免口腔、鼻咽分泌物污染。d）幼儿痰液收集困难时，可用消毒拭子刺激喉部弓I起咳嗽反射，用棉拭子采集标本。e）对无痰或少痰患者可用生理盐水雾化吸入，促使痰液咳出；对小儿可清压胸骨柄上方，诱导咳痰；昏迷患者可清洁口腔后用负压吸引法吸取痰液。f）标本不能及时送检，可暂时冷藏保存，但不能超过24小时。第三章分子生物学标本采集1.乙型肝炎病毒核酸定量检测（HBV-DNA）1.1 标本类型：血浆、血清、乳汁（禁用肝素抗凝剂）1.2 标本采集：1.2.1 血清-用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2毫升，注入无菌
35、的干燥管,室温（22-25。C）放置30-60分钟,血标本可自发完全凝集析出血清,或直接使用水平离心机500rpm离心5分钟，吸取上层血清,转移至1.5ml灭菌离心管。1.2.2 血浆-用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2毫升，注入含EDTA-2Na（乙二胺四乙酸二钠）或枸椽酸钠抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒混匀，510分钟后即可分离出血浆，转移至1.5ml灭菌离心管。1.3 标本储存和运输室温放置不超过8小时,4-8。C不超过72小时，20。C保存期6个月，长期保存于-7（C.应避免反复冻融。8小时内室温运输,超过8小时冷藏运输。1.4 拒收标本:141污染、严重溶血或脂血标本不能作测定。1.
36、4.1 未按规定时间和温度放置。1.4.2 采血量不足。1.4.3 标本无信息。1.4.4 信息与申请单不符。1.4.5 肝素抗凝标本。2 .人乳头瘤病毒基因分型检测（HPV-DNA）2.1 标本类型：宫颈脱落细胞样本和生殖泌尿道分泌物。2.2 标本采集：2.2.1 宫颈脱落细胞将宫颈刷中间细长的部分伸入宫颈管，外侧部分抵住宫颈外口，同一方向360。旋转3-5圈，进行取材。2.2.2 生殖泌尿道分泌物男性一用细小棉拭子伸入尿道约24厘米，捻动拭子采集分泌物，将棉拭子置无菌管,密闭送检（采集分泌物前2小时禁小便）。女性生殖道一用无菌生理盐水棉球洗去宫颈外分泌物,再用无菌棉拭子插入宫颈内,停5秒钟
37、后旋动棉拭子采集宫颈分泌物，将棉拭子置入无菌玻璃管，密闭送检。女性尿道一用无菌生理盐水棉球洗净尿道口，再用无菌棉拭子插入尿道约2厘米，捻动拭子采集分泌物，将棉拭子置入无菌玻璃管，密闭送检。2.3 标本储存和运输：标本可立即用于测试，也可保存于-20。C待测，保存期为6个月。标本运送时应采用0冰壶。2.4 拒收标本：2.4.1 污染标本不能作测定。2.4.2 未按规定时间和温度放置。2.4.3 标本无信息。2.4.4 信息与申请单不符。3 .其他标本类型的采集3.1 痰标本：用带盖的无菌一次性塑料瓶收集清晨第一口痰标本送检。（对于无痰或少痰的患者，（生理盐水）可用45加温的100g/LNaCL水
38、溶液雾化吸入或改变体位以使痰液易于咳出；对于小儿可以轻压胸骨柄上方以诱导咳痰，用无菌棉拭子刺激喉咙部引起咳嗽反射，用无菌棉拭子采集标本。）3.2 生殖道拭子：尿道或阴道分泌物由医生用专用的取样拭子（灭菌，一次性）采集样本，及时送检。采集生殖道拭子标本，要求病人在采样前2小时内不能排尿，采样时，将棉拭子伸入男性尿道及女性宫颈口2-3cm,转动一周以获得上皮细胞，将取样后的棉拭子放入LOml无菌生理盐水中漂洗片刻，在壁上挤干后丢弃，避免采集过多富含白细胞的脓液标本。3.3 咽拭子：由医生用专用的取样拭子（灭菌，一次性），适度用力拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌部；迅速将棉拭子放入装有Iml
39、生理盐水的采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封。3.4 疱疹液：先用75%酒精对疱疹周围的皮肤进行消毒,待干后，用消毒针刺破疱疹，用棉签蘸取疱疹液后,迅速将棉拭子放入装有Iml生理盐水的采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封。3.5 尿液：由病人自行留取中段尿液于无菌封闭的杯中送检。3.6 乳汁：按无菌取材要求留取乳汁3-4ml于无菌试管或无菌瓶中送检。3.7 其他体液及组织标本：由临床医生采集后放入消毒的容器中及时送检。第四章临床微生物标本采集1 .目的采集标本以做临床微生物检验。2 .适用范围适用于本科做临床微生物项目所需标本的采集。3 .物品准备无菌培养容器、血培养
40、瓶、一次性无菌拭子等。4 .检验申请单填写要求4.1 检验申请单采用电子申请或化验单申请，化验单申请用钢笔填写,使用正楷字，字迹清楚，填写完整。4.2 电子申请LIS条码或申请的化验单上包括内容：受检者姓名、性别、年龄、临床诊断、送检标本、检验项目、标本采集年月日时、申请医生及采样者签名。5 .常见微生物培养标本的采集5.1 血培养或骨髓培养标本的采集5.1.1 采血指征患者出现以下一种或同时具备几种临床表现时可作为血培养的重要指征：发热（38oC）或低温（436。,以间歇驰张型多见，革兰阴性杆菌,如大肠埃希菌引起的感染可见双峰热；寒战；白细胞增多（10.0109Lf特别是有核左移时）；粒细胞
41、减少（L0l09L）;血小板减少；皮肤、黏膜出血，常见于溶血性链球菌感染的菌血症，伤寒病人第4-10天可出现玫瑰疹,斑疹伤寒第4-6天可出现暗红色斑丘血疹；昏迷；多器官衰竭；血压降低；呼吸加快（呼吸率20/分或CO2分压32mmHg）;以及肝脾肿大；关节疼痛；C反应蛋白、内毒素、降钙素原升高等。对新生儿可疑菌血症,还应同时做尿液和脑脊液培养。5.1.2 血培养采集时间：只要怀疑患者有血流感染的可能，在考虑使用抗菌药物之前，都应立即采集血培养标本。若患者已行抗菌药物治疗，则应选择含有抗菌药物吸附物的培养瓶,并在下一次抗菌药物应用前或者血药浓度最低时采血培养。患者寒战或者发热初期采血，超过发热峰值
42、之后，病原菌会逐渐被机体免疫系清除,从而降低检出率。实验数据表明细菌入血后约1小时，寒战和发烧开始出现2小时内，此时为采集血培养标本进行病原菌培养的最佳时机。在不同的时间点采血只有以下情况才有必要：疑似感染性心内膜炎或其他血管内（如导管相关性感染）感染患者的连续性菌血症。要求：对怀疑菌血症、真菌血症的患者，在考虑使用抗菌药物之前，应立即采集血培养标本。5.1.3 血培养采集次数:5.1.3.1 对怀疑血流感染患者应至少从2个部位分2次采集血液标本进行培养,以提高阳性培养率5.1.3.2 可疑急性心内膜炎患者要立即取血作血培养，应在1-2小时内完成3套血培养的采集，采集后立即进行抗菌药的经验治疗
43、。如果24小时内报告阴性,则继续采集2套血培养。5.1.3.3 可疑的亚急性心内膜炎患者每间隔30分钟至Ih采集1套，连续采集3套标本。如果24小时内报告阴性，则继续采集2套血培养。说明：血培养不能在二至五天内进行重复，因为在抗生素治疗开始后血液中的细菌不会立即清除。研究表明,只做1套血培养病原菌的检出率仅为65%,两套血培养为80%,三套血培养为96%o单瓶或单套血培养不仅检出率不高，而且难以区分污染导致的假阳性,结果很难做出临床解释。通常情况菌血症或真菌血症的患者可通过临床表现来判断疗效,无需复查血培养或者连续续监测血培养。然而有两个例外：第一是感染性心内膜炎病人,对于他们的菌血症或真菌血
44、症是否被清除可被用于评I古和指导治疗：第二是与感染性心内膜炎无关的金黄色葡萄球菌血症，对其阳性血培养的48小时至96小时追踪可以很好地预测复杂的金黄色葡萄球菌血症2o5.1.4 血、骨髓培养的采集量：5.1.4.1 成人采血量810ml瓶最少5ml,如果采血量不足5ml或者大于IOmI,在报告单上备注：采血量不足5ml大于IOmI,对检验结果有影响。5.1.4.2 儿童的采血量不能超过其总血容量的1%,可按年龄或体重分别采足够的血量：对于新生儿败血症,最低的采血量不确定,通常0.75-1.0ml的血量是推荐的。说明：血标本采集的量是影响病原菌检出率的重要的因素B,4,5,6,病原菌检出率与采血
45、量成正比例增长3,4,6,每瓶加Iml的血液,病原菌的检出率就会相应增加。儿童患者同样有数据表明检出率与血容量成正比相关5.1.4.3 骨髓标本：用骨髓穿刺针一般从骼骨采集；骨髓采集量：l-2ml即可。5.1.4.4 成人一份血培养为2瓶，即1个需氧瓶和1个厌氧瓶,一次穿刺采血即为一份标本。采集第二份应从另外一个穿刺点获得。成人采血要求采集左右双侧各T分标本,总共4瓶，注明采集部位。儿童一般只做需氧培养，只采集一个儿童专用血培养瓶即可。采血量不足时应优先保证需氧瓶,90%以上的感染为需氧菌或兼性厌氧菌。5.1.5 血培养皮肤及培养瓶消毒5.1.5.1 皮肤消毒消毒重点是足够量的消毒剂、足够的消
46、毒面积和作用时间。a）三步法：75%酒精擦拭静脉穿刺部位,自然待干30秒以上，1%2%碘酊作用30秒或10%碘酊作用60秒，从穿刺点向外划圈消毒至消毒区域直径达3cm以上，75%酒精脱碘，待穿刺部位酒精挥发干燥后采血。对碘过敏的患者，采用70%异丙醇或者70%乙醇消毒60秒，待穿刺部位酒精挥发干燥后采血。b）其他皮肤消毒方法：洗必泰一步法：0.5%葡萄糖酸洗必素作用30s或者70%酒精消毒后自然干燥30秒钟。严格按照皮肤消毒步骤操作消毒外周静脉穿刺部位,消毒剂至少作用1分钟以上（推荐使用氯乙咤或2%碘酊2月龄儿童不推荐氯乙咤）o安尔碘使用方法：原液均匀涂擦二遍，或用原液直接喷于消毒部位二次。作
47、用1-2分钟。5.1.6 培养瓶消毒：去掉培养瓶口的塑料瓶盖，75%酒精用力擦拭血培养瓶橡皮塞子表面60秒，自然待干，将标本注入培养瓶内，轻轻颠倒混匀标本，以避免血液凝集。在怀疑炭疽芽抱杆菌或丝状真菌时使用碘液消毒瓶塞。注意：儿童采血量少，更应注意颠倒混匀。5.1.7 采集部位要求：推荐从外周静脉采集血液标本。说明：不建议采集动脉血，因其诊断价值没有比静脉血更大。尽量避免从静脉留置导管采血培养，因其常伴有高污染率8,9,10。如果必须从留置导管内采血，也应同时从外周静脉采集另外一个血培养标本以帮助阳性结果的判读。5.1.8 采集方法要求：a）在采血之前，血培养瓶的橡皮塞需使用75%酒精消毒并干燥，然后再严格按照皮肤消毒步骤操作进行穿刺部位的皮肤消毒。并等待足够的消毒时间。b）严格无菌操作，不允许在皮肤消毒后用手接触静脉，除非带有无菌手套。c）不推荐采血和接种血培养瓶更换注射器针头，采用真空采血装置能降低污染率。说明：无论采用何种采血方法，血培养可接受的污染率通常是3%llo5.1.9 血培养标本的运送要求：采血后应该立即送检。如不能立即送检，需室温保
