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1、水消毒效果鉴定试验1生活饮用水消毒效果鉴定1.1目的检测生活饮用水消毒剂与消毒器械的杀菌效果，以验证其对生活饮用水消毒能否达到卫生合格标准。1.2试验器材(I)大肠杆菌(8099)悬液。取37。C培养I8h24h的新鲜大肠杆菌斜面，用生理盐水洗下菌苔，混匀后再用生理盐水适当稀释，配制成试验用大肠杆菌悬液。(2)微孔滤膜滤器和滤膜(滤膜孔径为0.45m0.65m,滤膜大小示滤器型号确定，目前常用有直径为35mm和47mm两种)。(3)抽滤水泵或气泵。(4)恒温水浴箱。(5)秒表。(6)三角烧瓶。(7)广口玻璃瓶(500ml)(8)无齿镶子。(9)品红亚硫酸钠培养基：见附录A。(10)中和剂(鉴定
2、合格者，见2.1.1.5)。（三）细菌定量杀灭试验用其他器材(见2.1.1.7)(12)天然水样。(13)模拟现场消毒装置(见1.8)。(14)磁力搅拌器。13试验阶段饮用水消毒效果的鉴定应经过实验室杀菌试验，天然水样消毒试验两个阶段的检测。实验室试验的目的是以大肠杆菌为试验菌，用悬液定量杀菌试验法测出在试管中消毒所需的剂量。天然水样消毒试验是由自然水体取样，进一步验证受试消毒剂或方法对成分较复杂的天然水的消毒效果。对用于较大水体(如人工游泳池水、高层建筑二次供水)消毒的设备和方法，必要时尚需进行模拟现场或现场试验，以进一步验证其消毒效果。由于生活饮用水的卫生标准，除微生物外还需考虑化学污染等
3、方面，因此对其安全评价尚需由有关专业单位对其他条件，例如化学物质含量和PH值等，进行检测和判定，以对所鉴定的消毒剂或器械做出合格与否的综合评价。1.4试验菌污染水样的配制试验用试验菌污染水样用于试验室消毒试验。配制时，将用生理盐水配制的大肠杆菌悬液加入脱氯的自来水或蒸储水中，使其含菌量达到5IO4cfu100ml-5I05cfu100mlo1.5试验菌污染水样中活菌的培养计数(1)将纤维滤膜在蒸I水中煮沸消毒3次,每次15minc每次煮沸后需更换蒸储水洗涤23次,以除去残留溶剂。(2)将滤器用压力蒸汽灭菌(121,20min),也可用酒精火焰灭菌。(3)用无菌镜子夹取无菌的滤膜边缘，将粗燥面向
4、上，贴放在已灭菌滤器的滤床上，稳妥地固定好滤器。取一定量待检水样(稀释或不稀释)注入滤器中，加盖，打开抽气阀门，在负压005Mpa下抽滤。(4)水样滤完后，再抽气约5s,关上滤器阀门，取下滤器。用无菌镶子夹取滤膜边缘，移放在品红亚硫酸钠琼脂培养基平板上，滤膜截留细菌面向上。滤膜应与琼脂培养基完全紧贴，当中不得留有气泡，然后将平板倒置，放入37C恒温培养箱内培养22h24h.（5）观察结果和计数:计数滤膜上生长带有金属光泽的黑紫色大肠杆菌菌落，并计算出染菌水样中含有的大肠杆菌数（CfuZlOOml）o大肠杆菌数（或/ 100zw）=滤膜上菌落数X稀释倍数被检水样体积（”）1.6实验室杀菌试验操作
5、程序（1）饮水消毒剂杀菌试验1）试验分组试验组。申请消毒产品卫生许可批件时，按使用说明书规定的最短剂量，设定1个浓度，3个作用时间（使用说明书规定的最短作用时间，最短作用时间的1.5倍和最短作用时间的0.5倍），测定其对大肠杆菌的杀菌效果。进行消毒产品监督检测时，按使用说明书规定的最短剂量，设定1个浓度，1个作用时间（使用说明书规定的最短作用时间），测定其对大肠杆菌的杀菌效果。阳性对照组，以未经消毒的试验菌污染水样进行活菌培养计数；阴性对照组，以试验所用同批次未经使用的培养基进行培养，观察有无细菌生长。2）操作程序按1.4所示方法配制试验菌污染水样。将装有试验菌污染水样的三角烧瓶放入恒温水浴箱
6、（2（C2C）中，开动磁力搅拌器，使细菌在水中分布均匀。先取2份试验菌污染水样，按1.5所示方法进行大肠杆菌活菌计数（阳性对照组）。待水样的温度恒定后加入消毒剂，迅速搅拌均匀。从开始加消毒剂起计时，按规定时间吸取水样，注入装有中和剂的无菌三角烧瓶中，以终止消毒作用。将中和后水样，分别取100mLIom1,ImI各2份，按1.5所示方法进行大肠杆菌的活菌培养计数。将未接种大肠杆菌的试验用同批培养基平板2个，置温箱中培养（阴性对照组）。试验重复3次。3）结果评价当阳性对照组平均菌量在5XIO4cfu/100ml-5X105cfuI00ml,阴性对照组均无菌生长时。在3次试验中均使大肠杆菌下降至0/
7、100ml的最低剂量，可判定为实验室试验中饮水消毒最低有效剂量。若阳性对照和阴性对照未达上述要求，应寻找原因，纠正后重做试验。（2）饮水消毒器杀菌试验本节饮水消毒器械指能产生消毒液并用于饮水消毒的饮水消毒装置。1）试验分组试验组。申请消毒产品卫生许可批件时，按使用说明书规定的最低剂量，设定1个作用浓度（使用说明书规定的最低作用浓度）和3个作用时间（使用说明书规定的最短作用时间，最短作用时间的1.5倍和最短作用时间的0.5倍），测定其对大肠杆菌的杀菌效果。进行消毒产品监督检测时，按使用说明书规定的最低剂量，设定1个浓度（使用说明书规定的最低作用浓度）和1个作用时间（使用说明书规定的最短作用时间）
8、，测定其对大肠杆菌的杀菌效果。阳性对照组，以未经消毒的试验菌污染水样进行活菌培养计数；阴性对照组，以试验所用同批次未经使用的培养基进行培养，观察有无细菌生长。2）操作程序按1.4所示方法配制试验菌污染水样。取2份试验菌污染水样，按1.5所示方法进行大肠杆菌活菌计数（阳性对照组）。应用气压法或水泵法进行消毒处理。应用气压法时，按要求联接高压（2kgcm23kgcm2）气源、耐压水样贮水器（3kgcm2-5kgcm2）,流量计和饮水消毒器。应用水泵法时，则按要求联接耐压水样贮水器（3kgc?5kgcm2）、水泵、流量计和饮水消毒器。然后将加有试验菌的水样通过消毒器，将消毒过的水样放置至规定时间，再
9、分别取其加于含中和剂的灭菌三角瓶中，混匀。分别吸取中和后水样100ml,10ml,Iml各2份，按1.5所示方法进行大肠杆菌的活菌计数。将未接种大肠杆菌的试验用同批培养基平板2个，置培养箱中培养（阴性对照组）。试验重复3次。3）结果评价当阳性对照组平均含菌量在5X104cfu/100ml-5X105cfu100mlo阴性对照组均无菌生长时。在3次试验中使大肠杆菌均下降至0/10OmI的最低剂量，可判定为实验室试验中饮水消毒最低有效剂量。若阳性对照组和阴性对照组含菌量未达上述要求，应寻找原因，纠正后重做试验。（3）饮水过渡器除菌试验1）试验分组试验组。申请消毒产品卫生许可批件时，按使用说明书规定
10、的最大流量，测定其对大肠杆菌的除菌效果。阳性对照组，以未经消毒的试验菌污染水样进行活菌培养计数。阴性对照组，以试验所用同批次未经使用的培养基进行培养，观察有无细菌生长。2）操作程序按1.4所示方法配制试验菌污染水样。取2份试验菌污染水样，按1.5所示方法进行大肠杆菌活菌计数（阳性对照组）。按使用说明书规定的最大流量，将试验菌污染水样（见1.4）分段通过饮水过滤除菌装置。按规定过滤的水量，用无菌三角瓶分段采集:初始、1/4、2/4、3/4、4/4等各段流出的水样（不需加中和剂）。对过滤后各段水样，分别取IOom1、IOm1、ImI各2份，进行大肠杆菌活菌培养计数（见1.5）。将未接种大肠杆菌的试
11、验用同批培养基平板2个，置培养箱中培养（阴性对照组）。试验重复3次。3）结果评价当阳性对照组平均含菌量在5XIO,CfU/10OmI5XIO5cfu100mU阴性对照组均无菌生长时。在3次试验所有流量段水样中大肠杆菌下降至0/10OmI时，可判为实验室试验中饮水消毒效果合格。若阳性对照组和阴性对照组含菌量未达上述要求，应寻找原因，纠正后重做试验。1.7杀菌效果影响因素测定试验操作程序（用于饮用水化学消毒试验）（1）水温影响试验:将人工染有大肠杆菌的水样，温度分别调控在5C2C.20oC2C.302条件下，对不同温度的水样，按说明书上规定的最低使用剂量（1个浓度，1个作用时间）进行杀菌试验，观察
12、水温的影响。试验程序同1.5或1.6。试验重复3次。3次试验中，3个温度组杀菌效果均达合格标准，判为温度对该消毒剂杀菌效果影响不明显，所试剂量可在530条件下使用。否则应依据杀菌效果确定仅可在杀菌效果均达合格标准的温度区间内使用。试验中应设阳性对照和阴性对照组。两对照组结果未达要求见1.6（1）3）,应寻找原因，纠正后重做试验。（2）有机物影响试验腐殖酸配制：取Slg腐殖酸（分析纯）用少许2.0mol/L氢氧化钠溶液溶解，加蒸储水50ml,用滤纸过滤至Iooml容量瓶中，用2.0molLHCl溶液调节PH值至中性，并定容至IoomL比色测定实际色度。水样制备：在水样中加入腐殖酸，比照标准色度管
13、，使色度各为O度、10度、15度，然后分别加入大肠杆菌悬液，配成不同色度的人工染有大肠杆菌水样。消毒处理：按说明书上推荐的最低使用剂量（1个浓度，1个作用时间）进行杀菌试验，观察有机物的影响。试验程序同1.6（1）或L6（2）o试验重复3次。3次试验中，3个浓度的有机物组杀菌效果均达合格标准，判为有机物对该消毒剂杀菌效果影响不明显，所试剂量可用于色度低于15度水的处理。否则应依据杀菌效果确定仅可用于低于杀菌效果均达合格标准色度水的处理。试验中应设阳性对照和阴性对照组。两对照组结果未达要求见1.6（1）3）,应寻找原因，纠正后重做试验。3）水中PH值的影响试验水样制备：用氢氧化钠（分析纯）或盐酸
14、（分析纯）调水样PH值分别调为6.5,7.0和8.5,然后加入大肠杆菌悬液，配成不同PH值的试验菌污染水样。消毒处理：按说明书上推荐的最低使用剂量（1个浓度，1个作用时间）进行杀菌试验，观察PH值的影响。试验程序同1.6（1）或2.1.6（2）o试验重复3次。3次试验中，3种PH值的消毒剂浓度杀菌效果均达合格标准，判为PH值对该消毒剂杀菌效果影响不明显，所试剂量可用于PH值6.58.5水的处理。否则应依据杀菌效果确定仅可在杀菌效果均达合格标准的PH值区间内使用。试验中应设阳性对照和阴性对照组。两对照组结果未达要求见1.6（1）3）,应寻找原因，纠正后重做试验。1.8模拟现场试验和现场试验考虑到
15、实用情况下各种水质对消毒效果的影响，根据产品申报的使用范围，选用天然水样如井水、河水、湖水或高层建筑贮水箱的水等进行消毒试验。（1）饮水消毒剂对天然水样杀菌试验1）根据说明书的最低使用剂量选择1个浓度，1个作用时间，对天然水样进行杀菌试验。同时设置阳性对照组与阴性对照组。2）将装有天然水样的三角烧瓶放入恒温水浴箱（20C2C）中，开动磁力搅拌器，使细菌在水中分布均匀。取2份同批同类天然水样，每份100mL按1.5所示方法计数大肠菌群数（阳性对照组）。3）待水样的温度恒定后，加入消毒剂，迅速搅拌均匀。从开始加消毒剂起计时，按规定时间吸取水样，注入装有中和剂的无菌三角烧瓶中，以终止消毒作用。4）将
16、中和后水样，分别取100mI2份，按1.5所示方法进行大肠菌菌群的活菌培养计数。5）将未接种水样的试验用同批培养基平板2个，置培养箱中培养（阴性对照组）。6）试验重复3次。当阳性对照组均有菌生长。阴性对照组均无菌生长时，可判定在3次试验中均使大肠菌菌群下降至0100ml,可判定为对天然水样消毒合格。7）如阳性对照组含菌量未达上述要求和阴性对照组有菌生长，应寻找原因，纠正后重做试验。（2）饮水消毒器对天然水样杀菌试验1）根据使用说明书的最低使用剂量选择1个浓度，1个作用时间，对天然水样进行杀菌试验。2）试验前，先取2份试验用天然水样，每份100ml,按1.5所示方法进行大肠菌菌群的活菌培养计数（
17、阳性对照组）。然后，将天然水样本按1.6（2）2）要求通过消毒器进行消毒处理，将处理后水样移到含中和剂的三角烧瓶中，混匀。3）将中和的水样2份，每份100ml,按1.5所示方法进行大肠菌菌群的活菌培养计数。4）大肠菌菌群的活菌培养计数量，按1.5所示方法检测。用滤膜过滤法检测时，所用水量应一致,约数亳升。污染严重的天然水，检测时可适当稀释。5）将未接种水样的试验用同批培养基平板2个，置培养箱中培养（阴性对照组）。6）试验重复3次。当阳性对照组均有大肠菌群生长，阴性对照组均无菌生长时，在3次试验中均使大肠菌群下降至0100ml,可判定为对天然水样消毒合格。7）如阳性对照组含菌量未达上述要求和阴性
18、对照组有菌生长，应寻找原因，纠正后重做试验。（3）饮水过滤器对天然水样的除菌试验1）取2份试验用天然水样，每份100ml,按1.5所示方法进行大肠菌菌群的活菌培养计数。所得结果作为过滤前含菌量（阳性对照组）。2）按过滤器产品规定流量，将天然水样分段通过过滤器。按规定过漉的水量，用无菌三角瓶分段采集:初始、1/4、2/4、3/4、4/4等各段流出的水（不需加中和剂）。3）对过滤后各段水样，分别取100m1、IOm1、Iml各2份，按1.5所示方法进行大肠菌菌群的活菌培养计数。4）将未接种水样的试验用同批培养基平板2个，置培养箱中培养（阴性对照组）。5）试验重复3次。当阳性对照组均有菌生长，阴性对
19、照组均无菌生长，3次试验中所有流量段水样大肠菌群均降至0100ml,可判为对天然水样的消毒效果合格。6）如阳性对照组和阴性对照组含菌量未达上述要求，应寻找原因，纠正后重做试验。（4）高层建筑二次供水消毒设备和方法对较大水体消毒设备和方法的鉴定，在模拟现场和现场试验中选做其一即可，但首先应考虑后者，只有在无法进行现场试验时，才做模拟现场试验。大水体现场消毒试验的操作程序，随当时当地情况，设备大小和所采取的消毒方法而定。1）高层建筑二次供水消毒有两种主要方式，一是直接对贮水池中的水用物理或化学法消毒，一是将贮水池水引出通过消毒装置（如紫外线照射装置、过滤装置或消毒剂添加和搅拌装置等）进行消毒，遂后
20、再输送到用户。2）直接对水池中水进行消毒的设备和方法的鉴定，可参照游泳池水消毒设备和方法鉴定的有关要求进行消毒和采样检测（见2）o试验剂量选用使用说明书中规定者，样本按1.5所示方法进行活菌培养计数。检测中阴性对照组的设置和结果的评价，与天然水样杀菌试验相同见1.8（1）；1.8（2）；1.8（3）。但检测需重复5次，结果均符合要求者（使用含氯消毒剂消毒的水样，剩余氯量为0.3mgL-0.5mgL）可判为合格。3）将水引出后消毒的设备和方法的鉴定，可在进入消毒器和消毒后出水口管道上各加一三通阀门，分别采集消毒前和消毒后水样。将样本按1.5所示方法进行活菌培养计数。试验剂量选用使用说明书规定者。
21、检测中阴性对照组的设置和结果的评价，与天然水样杀菌试验相同见1.8（1）；1.8（2）；1.8（3）o但检测需重复5次，结果均符合要求者（使用含氯消毒剂消毒的水样，剩余氯量为0.3mgL05mgL）可判为合格。4）对条件不容许加装三通阀门时，可进行模拟现场试验。先设一大型水箱（大小根据鉴定的消毒设备流量和试验时间计算），在其出水口下游用管道依次连接水箱出口阀门、排水泵、三通阀门（一端接下面的流量计，另一端接一回流管，必备需要时可将菌悬液送回水箱）、流量计和所鉴定的消毒装置。消毒装置的进水口前装一三通阀门，以备采集阳性对照水样。试验时，水箱内盛装含大肠杆菌悬液（大肠杆菌浓度在5l（）4CfU10
22、0ml5l（）5cfu/100m1,见1.4）的水样。打开水箱出口阀门，根据流量计所示，用阀门和水泵控制流出水样的量和压力，并使按规定流量进入消毒装置。当水流按规定流量稳定地由消毒装置出水口流出后，先采阳性对照水样，而后由消毒装置出水口采集消毒后水样。将水样按2.5.5所示方法进行活菌培养计数。试验剂量选用使用说明书规定者。检测中，阴性对照组的设置和结果的评价，与天然水样杀菌试验相同见1.8（1）；1.8（2）；1.8（3）o但检测需重复5次，结果均符合要求者(使用含氯消毒剂消毒的水样，剩余氯量为0.3mgL05mgL)可判为合格。其他类似设备和方法亦可参照有关原则进行。2人工游泳池水消毒效果
23、鉴定(1)水样采集。游泳池水面WlOOOm2,设2个采样点，超过100Om2的，设3个采样点。(2)鉴定时应在暑季游泳人员处于高峰期时进行。室内游泳池可根据情况在其他季节进行，但亦应在游泳人员的高峰期。(3)采样时，使用无菌玻璃瓶在水面下30cm深处采集。再将水样加入有适量鉴定合格的中和剂溶液(见2.L125)的无菌玻璃瓶中。每点采1个样本。每日采2次，一次在清晨消毒前(作为阳性对照)，一次在消毒后当日游泳人员高峰时，作为消毒后样本。(4)试验剂量选用说明书规定者。对样本，应检测细菌总数和大肠菌群数。使用含氯消毒剂时，还应测定水中的剩余氯含量。检测方法按公共场所卫生标准监测检验方法中的规定进行。(5)消毒后样本检测结果，细菌总数应W100OCfU/ml,大肠菌群W18cfuL(见游泳场所卫生标准)。(6)检测按日重复5次。5次全部符合上述要求者可判为合格。3注意事项(1)在消毒前，对饮水消毒器与饮水过滤器，应用无菌水冲洗和通过5min-IOmin,以消除内表面污垢并证明管路通畅。(2)水处理中，极易遭污染，故试验材料、采样口和操作应严格保持无菌要求，否则可造成较大误差。(3)模拟试验所用多余的菌悬液、水样等，应消毒后方可排放。所用设备与物品亦须进行彻底消毒后再进行下一次试验。
