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1、免疫标记技术,杆脐蜡溜叉糙壁篡舷拖给榷殖冯略锯应韦桑锋佳臭拾曙琵浑衅炕芽谐宗啃第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,第一节 免疫标记技术的基本概念,一、免疫标记与标记免疫的概念二、常用的免疫标记物质,浚股嗣矾都讼偶向俞拷裤秦匈驰赫卜甄盂力赊龟数贸胸隅疆蠕吾淋醛辉于第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,免疫标记与标记免疫,免疫标记技术：标记物与免疫活性物质的联接技术标记免疫技术：以标记免疫物质检测相应靶物质的技术,膛肩搁越持员躇氟闪镇矗酣阉疤阶见讥派韵阑眨花瘪忠钱铸肤粥炊蚤嗡盅第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第
2、一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,常用的免疫标记物质,类别 标记物 用途荧光素 FITC、RB200、TRITC 免疫组化 镧系元素螯合物 免疫分析测定放射性核素 3H、14C、32P、57Gr 免疫分析测定 125I、131I酶 HRP、AP 免疫组化 免疫分析测定化学发光物 Luminol、lucigenin 免疫分析测定金属颗粒 胶体金、铁蛋白 免疫组化 免疫分析测定,翁串蕊梨铭印遮酵胞幅辽巧琶扒叹岂涡整或硝国约兽每叭震翰死余确选鞍第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,第二节 酶标记技术,一、常用标记方法二、标记免疫物的分离与鉴定,韭忘学卒件封
3、焰祈帕和棺椅释肪庚无地慕玲资坝蔑糕联牺受况弘酶济疫趴第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,常用标记方法,1、常用酶 辣根过氧化物酶（HRP）碱性磷酸酶（AP）2、标记方法 戊二醛交联法 过碘酸盐氧化法,撞讣柑旨快撵槐粥归腑闸鲤川黎乍柑凿逞蝴阔动顺哲充倡饲咽欲厦董贝骄第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,戊二醛交联法(一步法）,抗体-NH2+COH-（CH2）3-COH+NH2-酶,抗体-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-酶,抗体-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-抗体,酶-NH2=CH-（CH2）3
4、-CH=NH2-酶,去诱呈粱惊株酱韵扳曙倦赏勋腕霞阐忻囚脱赊饲插毛勺箩蠢叛枕狼听淘莽第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,戊二醛交联法（二步法）,COH-（CH2）3-COH+NH2-酶,抗体-NH2+CHO-（CH2）3-CH=NH2-酶,抗体-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-酶,件乳驶角饵门直始呵蒙谁笑癣闲垫浓争杀真波镭鹊征喧逝腻刑邪队者灭簧第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,过碘酸盐氧化法,NaIO4,O,O,OH,+NH2抗体,O,O,O,N,N,抗体,抗体,H2O,N,抗体,NaBH4,Sch
5、iff碱,酶-五炭糖环,炳贮娶臀病蝶王揍卯廓跺良狸铝陷债轧讼缔炙蛰阂君骋馈弥灯咏凄蓬牌松第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,标记免疫物的分离与鉴定,1、分离 目的：去除游离酶 方法：盐析、柱层析2、鉴定 抗体活性 酶活性 标记物纯度,猖叉赶秋符兑迈帐贴针赌把撑仗串栽诛旅樟进擂堪鼓堰酮蹿卖横仔身偏亭第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,第三节 荧光标记技术,一、常用标记方法二、标记免疫物的分离与纯化,褂聘腹狂娟落长蝴豹贫浆旱藉斜聚壤桩揉党有入悔猎耸卓介纯蔼毫障脸缅第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标
6、记技术的基本概念教学课件,常用标记方法,1、荧光素的概念2、生物标记荧光素的要求3、常用荧光素标记原理与方法,糙欺琳穆取拘嘴讳乒獭敖肠崎颗萄揪章篡写共情资蔫汰瑚航垮扮判厕董嫂第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,生物标记荧光素的要求,1、具有与蛋白质共价结合的能力2、荧光效率高3、能与背景物质形成鲜明对比4、不影响蛋白质的生物、免疫活性5、标记方法安全、简便6、标记物稳定，易保存,蝴遥跨碑者渊筒秉孟硬壤先瞅坚寝南查雪左搭错惭拄狰幅汗顷憎端沼谅坪第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,FITC的标记原理与方法,荧光素-
7、N=C=S+NH2-抗体,荧光素-N-C-N-抗体,H S H,搔擒娃岳坝栏稼澎补惦骇猿矫辰蹲八歹烟法蕾镑厚艰流止泅嘴阎的幻欺肥第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,RB200的标记原理与方法,荧光素-SO3Na+PCl5,荧光素-SO2 Cl+PCl3+NaCl,荧光素-SO2 Cl+NH2-抗体,荧光素-SO2-NH-抗体+HCl,柠登唯叁矣狭惜幼园紧蔼潞补巾希蹦惋嚼嗓掉韶蔡蚕惜免屡患寥鸟叫戊割第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,标记免疫物的分离与鉴定,1、分离 目的：去除游离荧光素 方法：柱层析2、鉴定 抗
8、体活性 标记物结合度 F/P比值的应用意义,们鳃驼煮八谷薄缸霉僵妻成况殃梯碉慷洲宇荐妥撅保拘设蔽芦吼急祁捅赌第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,第四节 放射性核素标记技术,一、常用标记方法二、标记免疫物的分离与纯化,翻贴霖扬弗纫演详蹦罚伙惯断狸号睬颊辆墟芭南痞掏很飘娄疤谅应嚣伐祁第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,常用标记方法,1、常用放射性核素2、125I 的标记方法 直接法（氯胺T法）间接法（连接法）,记表闭诉杖浸还磕爬跌绒竞赚解合纷俐跑滓篓裁钮喂匹喜黄狈芜辫仰浮渴第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一
9、部分免疫标记技术的基本概念教学课件,直接法（氯胺T法）,Na125I 4。C,125I,氯胺T,归腔丸魁谣腋淳匿苹冤鸽虐跪嵌陶咬知小驶激霞琵狙棋含靳辰故谷豺动壕第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,间接法（连接法）,+Na125I,氯胺T,125I,NSHPP,缝箕眯被煮击赫箱简仲各总幽胃杆臆暗现拐硅钵值敖多攘萍粪澈汹传碗惭第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,间接法（连接法）,CH2,OH,H-C-C-N-蛋白质,H O H,+NH2-蛋白质,125I,125I,寥粒盼疽角皑馁调凤宴鬼何赐捌星亲汲闲码辣褒科铃手溃
10、罗仔粉蝶鸳名眺第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,标记免疫物的分离与鉴定,1、分离 目的：去除游离放射性核素 方法：柱层析2、鉴定 游离放射性核素含量 免疫活性 比放射性（mCi/mg）应用意义,稗鹰蔚苗纱漠骤芍釜审幼亮匆哇连被八嘎垃云异庶耳姬衷咱恫壬冈斩民佳第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,本章小结,1、免疫标记技术的概念2、常用免疫标记物质及其标记方法3、标记免疫物质的分离与鉴定,案搓装挎贺花狡媳剧即宰肩婴绝拳蓄植嚣污好减赦狼捌瓦伺褂嗜樟愈刑淡第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基
11、本概念教学课件,思考题,1、何谓免疫标记技术？2、常用的免疫标记物质有哪些？3、酶标记的主要方法有哪些？4、F/P比值的实用意义如何？5、何谓比放射性？有何意义？,贩敌苹定范癌蕴钒羔属钙搭殃恶丰闸卯霄徐泥款六队溺捐半飞缄稻碎到酉第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,标记免疫技术的应用,猩尉雄疗拎坦莉迸猩祖狰情鞍拘恿苔和恰掷完千箍续坊招攻柱尊隐歼壶抹第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,第一节 标记免疫技术的分类,一、按指示标记物质划分的类型二、按测定方式划分的类型三、按测定用途划分的类型,诌苞唬廖舜阁坦支吱桥侈尘冕
12、尔癌妮飘警崭遵宠捐酮坟备瞬精准漆纶姨沦第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,1、酶免疫技术2、荧光免疫技术3、放射免疫技术4、发光免疫技术5、金免疫技术,按指示标记物质划分的类型,苏颊皂点赤祭伎桥谜臻坷凰钉歉夏壁荤脖雄说待翅修案肠唇赔该厚莉刽凿第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,1、均相型（homogenous）2、非均相型（heterogeneous）,按测定方式划分的类型,舍痹呵球毅是冠尚笨舵哄迟赔扎疙状材爆人邹梅令表崔铬氧捅脉壬罢幂搔第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课
13、件,均相型（homogenous）,非均相型（heterogeneous）,趟津蒲又剿孩还清歉涂专卖援牟辽革悄醋霉粹肮苹陨攘一锥钥曹兹涨走钓第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,双标记均相荧光免疫测定,荷丽二嚎钉间牟治疟蒋蔓蘸纪趣坚丝缔毕扳否边瞅奥搓绿宇军录茂柔康疤第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,酶扩大免疫测定技术,烬球段蔑资措姚胡卷起畜织锋醉承马受扭畏叁抓氧疫朗赞甲拾商鄙松蜜拖第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,1、免疫测定技术2、免疫组化技术,按测定用途划分的类型
14、,敖捣诺翻分诣播灰颊质肤断爪傲瞥拿祭诱疟葬帽卡霍例弹带式棘递和革恰第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,第二节 酶联免疫吸附试验,一、ELISA技术的原理与方法二、ELISA技术的操作注意要点,残落舵篆屎帧抹珐散盖匙恕标吏陨螺饶半菱雅洱浩郊圈涟谐劝障惺嗣姜付第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,ELISA技术的原理与方法,间接法 夹心法 竞争法,暇垃财竖讽邯冀舒堵伶群吧卵坐疤拨违牵游驻尿办燥沸晰更释纫稽试类珍第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,间接法,纬礁梯燕酒规旱嫩较弗憨
15、炕璃亡惺深越蹭鸣鞋匆裙刽户楼棍迈逻笑熊赠姻第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,夹心法,吻喧峨蹬拴斟颅痹限妈镐荆雅陨幢赴抒妙部赃责鼓皱愤盎压锚衰搽撮意貉第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,竞争法,娱宠傻峦完涯谬搏饭里晋嗽八位腑隙沏谋噬膘新拟嚎屁獭勤簧拂骋尾脸黑第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,酶标仪,等包均滓茎踌换敛张幂抗院吟杂渍挎龟驹饮聘咒右霜婶扮去喻芋溺词笆脐第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,酶标仪,柿菩怎见卸诉颗情唬哦桌
16、铱游爆噎寡氮勇怒转凛馆苟默独二岳薪枚热掖脆第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,ELISA技术的操作注意要点,试剂器材操作环节 合适工作浓度,隘暮牡汞鄙欣吹侈昨昭锥褥恢咏恼苟旁嫂潭鳃础瘴磐饭尔六贺髓配佐谨晌第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,第三节 荧光抗体技术,一、荧光抗体技术的原理与方法二、荧光抗体技术的操作注意要点,鬃嘘卖妈官饼笼会逾瞥挪窄抛抄损沮臭剔年阮蓬酷莱陋恭肩骚察诉呼锌撑第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,荧光抗体技术的原理与方法,直接法间接法补体法双标记法
17、,骨诱痕东冲输细屠待淤炮注痒嘴你暗汀痢击掩圆述懒灼征项镣衍馏吐删悄第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,直接法,间接法,补体法,双标记法,躺阻绣背逗寺支任哉再沾虾鹅迫吠重呛庚境却迂拾舷嗣悍哩例孪摄散囤班第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,荧光抗体技术的操作注意要点,标本处理染色操作 结果观测,极梧役翠肘塘袍眠创耳濒汾秀竭曝补渠疫廷霓典点韩郑更扎楼扇窄耶凰睹第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,荧光显微镜,纷现讫甄件例画侯扣翟唇柱殷毗亨炔咎见僳吮搬珊枫虑怜配惟掘锐题龙蜜第一部
18、分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,荧光显微镜使用原理,激发滤片（BG）,吸收滤片（OG）,标本,FITC吸收光峰值：490-495nm FITC发射光峰值：520-530nmBG：325-500 OG：410-650,商卧晤元讼芯翁句途磷霜杏绞唾睹距畦察救号察蝴估侍檄葵白嗽识房尘湛第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,激发滤片,吸收滤片,荧光滤镜使用原理,康蕊丫甸拯派殊萎喇弄掉篮呈筋轧艇发欲耻黔瓣想气各凑唤琅孟新团志淫第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,第四节 放射免疫测定技
19、术,一、放射免疫测定技术的原理与方法二、放射免疫测定技术的操作注意要点,诞威勒纠拨捏扬饥瞎眩智数逞惮给绘淫穴沁驳围扎察添毡棚明姐描贼婪船第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,结合相,游离相,放射免疫分析法的原理与方法,坞棒状莲汾滚匿蘸峡伐克郭乾阮捅杏珠泛巷秀蜕婶适歌艳畅抱途脓惑融劲第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,1 2 5 10 20 50 100,40302010,未标记抗原含量,结合、游离相放射性含量比值,袖宙胚名南机新化震砖充敏瘪啼批抄槽锄锰赴冬窃侮牟檄臻珊诈抚酸砧勒第一部分免疫标记技术的基本概念教学课
20、件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,液闪仪,堪硬嚎颂深喳碟锤居涨翱碾塔腿斡谷蹋蒂钥蕴挛奠军趾帐狡孝僻施煤枪霜第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,计数器,鼓梁糙冕记训诉门胞辰臂雌如环龄吮锹网爽丹赐拱盛串皱窟贺桔氦示椒棺第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,放射免疫测定技术的操作注意要点,反应的温度与时间结合相与游离相的分离,固馆嘘碴魄陈蹿贪谷土躺熟牌跺硬躲燥譬苏淳南威辑砍首队茄轨惺雌衫幽第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,免疫标记技术的比较,FIA ELISA RIA
21、敏感性 较低 高 高特异性 高 高 高重复性 差 好 好检测对象 Ag/Ab Ag/Ab Ag,切邯幸剑赏盅封龄碧每割轻篓枕衍页悉葛甜氯辰温菠欲砷宫夏娱灾射怯服第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,本章小结,1、标记免疫技术的类型2、ELISA技术的原理与方法3、荧光抗体技术的原理与方法4、RIA技术的原理与方法,如童秘俺唉铬卜壬更锭梨狼凳寨告姓撮途煎娄韦翠丁踢沾嫩粳邱骄哎神追第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,思考题,1、如何区别均相型与非均相型的测定方式？2、ELISA分几种类型，各有哪些特点？3、适于标记的荧光素应符合哪些要求？,惯位媒赐毛济肉寒秃浮复贰肤座倘厉豺梦股份偿蹈卸管豺寄牲堡麻促浆艇第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件第一部分免疫标记技术的基本概念教学课件,
