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1、G试验检测及内毒素检测的临床意义,Part III,临床评价,G试验-深部真菌感染检测,侵袭性真菌感染（IFI）的定义,定义:指致病性真菌侵犯皮 下组织、黏膜、肌肉和内脏器官等所引起的真菌感染性疾病，危害性较大。,条件致病性真菌1.念珠菌属-念珠菌血症2.曲霉菌属-侵袭性肺曲霉菌病（IPA)3.其他,侵袭性真菌感染的特点,1.不产生内毒 素和外毒素,4.早期症状无特异性，往往被原发病掩盖，病程长，发现较晚，死亡率高,2.致病力一般 较弱，机体免 疫低下时发生,3.感染菌种变化，白色念珠菌感染下降，曲霉菌感染增长趋势上升明显,侵袭性真菌病（IFD）的诱因,使用激素治疗的病人,侵袭性真菌感染（IF
2、I）现状,IFI诊断困难及漏诊情况严重,IFI发生率不断增加,IFI感染病死率居高不下,1,2,3,严重真菌感染迅速上升势头,危重病人的存活期延长,延长了真菌感染的 高 危 期,使此类患者业已增加的人数进一步扩大,医学和相关科学的进步,是日益严重的威胁！,国内深部真菌感染不容忽视,引自北京协和医院王爱霞主任课件,20年内院内149例真菌感染的变化,侵袭性真菌感染（IFI）现状,美国四大医疗中心做的关于IFI的一项回顾性研究,Garey KW et al.Clin Infect Dis 2006,43:2531.,死亡率(%),延迟治疗时间（d）,侵袭性真菌感染（IFI）现状,尸检研究发现：北京
3、协和医院1953-1993年间3447例尸检，发现深部真菌感染85例，其中生前明确真菌感染诊断者仅5例，占5.9，漏诊率高达94.1。,诊断困难的主要原因：-临床表现不典型，易被基础疾病所掩盖-确诊常需侵入性手段获得组织标本，侵入性操作常因患者 的病情所限难以实施-真菌检测项目开展相对不足或滞后,IFI诊断困难及漏诊情况严重,侵袭性真菌感染的临床检测方法对比,G 试 验,1-3-D-葡聚糖可特异性激活鲎（Limulus）变形细胞裂解物中的G因子，引起裂解物凝固，故称G试验。,（1,3）-D-葡聚糖广泛存在于真菌细胞壁中，占真菌壁成分50%以上。是真菌细胞壁上的特有成分 用于侵袭性真菌感染的早期
4、诊断,1-3-D-葡聚糖本质及特点,(1-3)-D-葡聚糖特性,对热极为稳定，高压121并不能使其灭活。在念珠菌和曲霉菌细胞壁中含量较多，对G试验灵敏。,当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞的吞噬、消化等处理后，(1-3)-D-葡聚糖可从胞壁中释放出来，从而使血液及其它体液中含量增高。当真菌在体内含量减少时，机体免疫系统可将其清除。,在浅部真菌感染中，(1-3)-D-葡聚糖未被释放出来，故其在体液中的量不增高。,G试验检测的特点,可检测多种致病真菌感染：念珠菌，曲霉，肺孢子菌，镰刀菌，地霉，毛孢子菌等,G试验检测一般先于临床症状平均四天 BG值升高平均早于发热5 d，早于呼吸道症状平均1
5、07 d，早于HRCT检查平均93 d。高 蕾，周 新.(1，3)一 D葡聚糖检测在侵袭性真菌感染中的诊断意义J.中国感染与化疗杂志,2008,3(2),123-125.,对于念珠菌血症,G试验检测是首选检查 J.Clin.Microbiol.2008.46:10091013.,侵袭性真菌感染的诊断标准EORTC/MSG2008修订版,宿主因素临床特征病原学真菌镜检真菌培养组织病理学检查血清学检查方法（间接证据）G-test临床诊断,Clinical Infectious Diseases 2008;46,微生物学标准:,（1）痰或支气管肺泡灌洗液培养呈霉菌（2）鼻窦抽取液直接镜检或细胞学检查
6、，或培养呈霉菌阳性；（3）痰或支气管肺泡灌洗液经直接镜检或细胞学检查发现霉菌或隐球菌；（4）支气管肺泡灌洗液、脑脊液或2份以上的血液样品呈曲霉菌抗原（半乳甘露聚糖检测、GM试验）阳性；（5）血液中(1,3)-D葡聚糖检测（G试验）阳性；（6）血中隐球菌抗原阳性；（7）无菌体液中经直接镜检或细胞学检查发现真菌；（8）未留置尿管的情况下，连续2份尿样培养均呈酵母菌阳性或尿检见念珠菌管型；（9）血培养呈酵母菌阳性；（10）肺部异常，与下呼吸道感染相关的标本中（血液、痰液和支气管肺泡灌洗液等）多次培养无任何致病细菌。,Ascioglu et al 2002 Clin Infect Dis 34 7-1
7、4,侵袭性真菌感染的诊断标准：,0,36,37,38,39,40,41,体温(C),实验室检查指导临床诊断与治疗,组织培养,+,组织学检查,+,G、GM试验,+,PCR,+,治疗策略,疾病疑似程度,-7,0,7,14,21,28,35,42,49,56,63,-14,0.1,1,10,粒细胞(log10 x109/L),宿主因素,-常平 南方医科大学珠江医院 重症医学科,Part III,临床评价,G试验-真菌检测,内毒素定量检测在临床治疗中的重要意义,项目介绍：,定义,细菌内毒素（Endotoxin）是G-菌细胞壁上的特有结构，为外源性致热原，它可激活中性粒细胞等，使之释放出一种内源性热原质
8、，作用于体温调节中枢引起发热。内毒素的主要化学成分为脂多糖（LPS）中的类脂A。,内毒素的代谢目前实验研究认为：一般细菌内毒素在体内1-1.5小时达到最高峰值，5-6小时逐渐衰减下来。,体内内毒素的来源,检测物质:脂多糖(内毒素主要成分)脂多糖可特异性激活鲎（Limulus）变形细胞裂解物中的C因子，再激活B因子，经过一系列反应，最终引起裂解物凝固的过程。,实验原理:,实验原理图：,细菌内毒素 因子C 活化因子C 因子B 活化因子B 凝固酶原 凝固酶 凝固蛋白原 凝固蛋白（凝胶）,传统热原检测方法与MB-80方法比较,内毒素检测的临床应用,体液内毒素水平是严重细菌性炎症的一个重要的特异性指标，
9、而且也是脓毒症和多脏器衰竭的可靠指标。不仅可用于感染类别的鉴别诊断，也可用于感染控制和病情转归的判定。,内毒素检测的临床意义,1.系统组成：1）仪器 MB-80主机（MB-80(E)、MB-80(D)、MB-80(S)、MB-80(V)、MB-80(M)）2）MB-80软件系统 3）试剂(配套真菌、内毒素试剂盒）4）配套无热原耗材2.系统功能：快速定量检测深部真菌和内毒素，帮助临床医生早期诊断目前常规方法难以确诊的侵袭性真菌感染、革兰氏阴性菌感染，便于临床医生的早期诊断、早期治疗及对治疗的疗效进行判定。3.可检测标本：血液、尿液、脑脊液、胸腔积液、腹水等。血液透析液，透析用水-（内毒素检测）,
10、MB-80系统,MB-80优势,快速-1个小时完成检测动态-动态检测定量-定量检测灵敏-真菌（1-3）-D葡聚糖最低检测量5pg/ml 内毒素最低检测量1pg/ml,适合服务临床科室,呼吸科 血液科 肿瘤科 烧伤科 感染科 ICU病房 器官移植部门等,仪器检测原理,动态比浊法：动态定量检测真菌可溶性抗原（1-3）-D葡聚糖，革兰阴性菌可溶性抗原（脂多糖），系统通过测定生物试剂与检测样品中抗原抗体反应生成浊度，采用动态比浊法，连续检测浊度的变化,建立时间（T）与微生物含量（C）关系的标准曲线，通过光电转换原理，经软件系统分析得出具体检测值，得出检测样品中含真菌或内毒素含量。,临床阈值,Cut-o
11、ff：阴性10 pg/ml中介1020 pg/ml阳性20 pg/ml儿童阳性50pg/ml（真菌检测）,MB-80系统定量测定(1-3)-D-葡聚糖的临床意义,深部真菌感染增多且复杂，早期症状无特异性，往往被原发病掩盖，病程长，发现较晚，死亡率高。因此对深部真菌感染治疗成败的关键在于早期诊断。,早期诊断,快速诊断,指导用药,评价效果,真菌感染就医的患者，往往病情严重，传统的微生物分离、培养与鉴定需要时间较长，患者在等待期间有可能病情加重，甚至死亡。,快速确定真菌感染后，选择好治疗方案,有针对性使用抗真菌类药物。为临床选用副作用小，疗效高，价格适宜的药物提供准确的依据。,应用抗真菌药物后，定期
12、检测血浆中葡聚糖浓度变化，评价选用药物的有效性。,临床评价,例1-徐英春 北京协和医院 检验科,肝炎，右肺实变，右胸腔积液支气管镜做细菌，TB、真菌，血培养结果均阴性8-19:ICU:经验治疗：拜复乐+万古霉素8-20痰涂片：在中性粒细胞内可见革兰阳性球菌少量PCT:7.9ng/ml治疗：特治星+万古霉素,8-26T：38C，不能脱呼吸机WBC:15.0 x109/L8-27:会诊COPD？非典病原体？PCP？真菌？抗菌药物？检查：G试验,G试验：80.16pg/ml,泰能+斯沃+两性B,G试验（pg/ml）变化情况,G试验：9.31,体温的变化情况,泰能+斯沃+两性B,WBC（109/L）的变化情况,泰能+斯沃+两性B,总 结,分析前：无热原采血管、清洁的检测环境连续2次G试验阳性，可提高敏感性和PPV临床可能出现假阳性情况，请结合其它检测结果和临床情况进行分析动态监测：反映感染、疗效、有助于分析假阳性重视涂片、培养、药敏基础检测结果一定要结合临床进行分析，不可孤立！,结 论,MB-80微生物快速动态检测系统通过临床对比试验，证明该仪器可敏感、特异、快速检测出人体血液中的1-3-D葡聚糖、脂多糖含量，结果准确可靠，能为临床医生早期确诊深部真菌感染及革兰氏阴性菌感染提供有价值的诊治参考依据。-中华医院感染学杂志,2005,15(3):354-355,
